摘要
第一部分PMQ上调成熟3T3-L1脂肪细胞脂联素的表达 目的：成熟的脂肪细胞是机体脂肪组织中主要的细胞组分，本实验研究PMQ对成熟的3T3-L1脂肪细胞脂联素表达的影响及可能存在的量效关系和时效关系. 方法：3T3-L1前脂肪细胞诱导分化成熟后，给予不同浓度PMQ（0.1,0.3,1,3,10μM），作用24小时，检测脂肪细胞脂联素mRNA和蛋白质表达水平。观察给予3μM PMQ后0,3,6,12,24,48小时各时间点脂联素表达的变化。 结果：PMQ上调成熟3T3-L1脂肪细胞的脂联素mRNA及蛋白质表达，此作用呈明显的浓度和时间依赖性。 第二部分 PMQ上调脂联素表达的机制研究 目的：研究PMQ增强脂联素表达的分子机制. 方法：3T3-L1前脂肪细胞分化成熟后，给予不同浓度PMQ（0.1,0.3,1,3,10μM），作用24小时。分别检测各组脂肪细胞PPARγ、TNF-α和IL-6的mRNA和蛋白质表达水平；TNF-α和IL-6的分泌水平；AKT的磷酸化水平。观察PPARγ拮抗剂GW9662（10μM）和PI3K抑制剂wortmannin（100 nM）对PMQ上调脂联素表达作用的影响。 结果：①PMQ浓度依赖性促进PPARγmRNA和蛋白质表达。②PMQ对总AKT无明显影响，但浓度依赖性促进磷酸化AKT的表达。③GW9662和wortmannin本身对脂肪细胞脂联素的表达无明显影响，但能明显拮抗PMQ增强adiponectin mRNA和蛋白质表达的作用。④PMQ浓度依赖性降低TNF-α和IL-6 mRNA表达和分泌. 结论：PMQ同过增强PPARγ和磷酸化AKT，降低TNF-α和IL-6的表达及分泌增强脂联素的表达。 第三部分 PMQ对分化过程中脂肪细胞PPARs和脂肪细胞因子表达的影响 目的：脂肪细胞的年更新率约为20%，即每一瞬间都有相当比例的细胞处在分化过程中，本实验研究PMQ对分化过程中脂肪细胞PPARs和脂肪细胞因子表达的影响。 方法：对3T3-L1前脂肪细胞进行诱导分化，全程给予PMQ（6天）。分化的第六天提取总RNA和总蛋白，分别检测PPARs和脂肪细胞因子mRNA表达水平、PPARγ和脂联素蛋白质表达水平。 结果：①PMQ明显促进PPARα，PPARβ和PPARγ的mRNA表达水平和PPARγ蛋白质表达；②PMQ明显促进脂联素的mRNA和蛋白质表达；③PMQ明显降低TNF-α和IL-6 mRNA表达水平；PMQ对FGF-21表达无明显影响。 结论：PMQ促进分化过程中脂肪细胞PPARs表达，促进脂联素mRNA和蛋白质表达，抑制IL-6及TNF-αmRNA表达，对FGF-21表达无明显影响。 第四部分5-PBDMA对分化过程中脂肪细胞PPARs和脂肪细胞因子表达的影响 目的：研究5-苯氧丁基二甲基芹菜素（5-BPDMA）对分化过程中脂肪细胞PPARs和脂肪细胞因子表达的影响。 方法：对3T3-L1前脂肪细胞进行诱导分化，全程给予5-PBDMA（6天）。分化的第六天提取总RNA，检测PPARs和脂肪细胞因子mRNA表达水平。 结果：①5BP-DMA对分化过程中脂肪细胞PPARs家族的mRNA表达无明显影响；②低浓度的5-PBDMA（0.1,0.3μM）明显促进脂肪细胞脂联素mRNA表达，较高浓度5-PBDMA（3,10μM）抑制脂联素mRNA表达；③5-PBDMA明显抑制IL-6和TNF-αmRNA表达水平，对FGF-21表达无明显影响。 结论：5-PBDMA对PPARs表达无明显影响,抑制TNF-α和IL-6表达,对脂联素mRNA表达的影响呈双向。
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