摘要
水稻是最重要的粮食作物之一。培育抗虫品种是水稻品种选育的重要目标。近年来,植物转基因技术的发展为培育高效抗虫水稻品种开辟了新的途径。Bt基因是目前应用最为广泛的高效抗虫基因。 目前多数转化方法都是通过标记基因筛选转化细胞和非转化细胞。标记基因在提高转化子筛选效率的同时,可能会带来一些潜在的安全性问题。因此建立无选择标记的转基因体系是转基因研究的重要方向。来自噬菌体P1的Cre/loxP重组系统是一种有效的标记删除方法。在这个系统中,Cre酶可以精确的识别和切割位于两个loxP位点之间的筛选标记基因。 本研究我们使用了能定向切除潮霉素抗性标记基因loxP位点识别系统,利用农杆菌介导法成功地将bt抗虫基因导入安徽主栽水稻品种“晚粳97”中,主要结果概括如下: 1.本文研究了水稻组织培养的起始材料和培养条件:幼胚的出愈率明显高于成熟胚;愈伤组织诱导的2,4-D最佳浓度为2.0 mg·L-1,在此浓度下诱导的愈伤组织生长能力强;愈伤组织分化前适度的干燥处理有助于提高转化效率。 2.在十批水稻转化实验中,经50mg/l潮霉素浓度筛选,共获得58个抗性愈伤组织,平均转化率为0.74%。通过继代分化,最终得到了24棵转loxp-hpt-loxp-bt抗性植株。对潮霉素抗性植株进行PCR检测和Southern杂交分析,结果显示外源基因已经整合到水稻基因组中。
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