摘要
小麦Avenin-like蛋白是一种新型的种子储藏蛋白,因其富含半胱氨酸残基,推测可能影响小麦的加工品质。研究Avenin-like蛋白与小麦加工品质之间的关系,有助于揭示小麦加工品质的形成机理。 本研究以已获得的avenin-like b转基因小麦植株为研究对象,在DNA和蛋白质分子水平上分别对转基因植株及其后代进行鉴定筛选。采用Southern blot杂交技术,检测转基因植株目的基因 avenin-like b的整合拷贝数;同时采用Western blot杂交技术,检测转基因植株种子中Avenin-like b蛋白的表达数量,筛选获得了外源avenin-like b基因多拷贝且过量表达的转基因小麦植株,为进一步研究avenin-like b基因的功能提供了分析材料。主要研究结果如下: (1)成功构建了avenin-like b基因的原核表达载体 pET32a-avel,实现了avenin-like b基因在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21中高效表达;并且通过亲和层析分离纯化技术,获得了Avenin-like b蛋白,经用于免疫家兔,制备了Avenin-like b蛋白的多克隆抗体。 (2)通过PCR结合Southern blot技术,检测转基因小麦中avenin-like b基因的整合及拷贝数,结果证实了avenin-like b基因成功整合到转基因植株基因组中。 (2)利用制备的多克隆抗体,应用Western blot杂交技术,检测转基因植株种子中Avenin-like b蛋白的表达数量,结果表明与野生型植株相比,转基因植株种子中的Avenin-like b蛋白表达量显著提高。 本研究从DNA和蛋白质的分子水平上完成了对转基因植株及其后代的分析鉴定,获得了avenin-like b基因多拷贝数、且过量表达的转基因植株后代,为进一步研究avenin-like b基因与小麦加工品质关系提供了新的研究材料,为阐明avenin-like b基因在小麦加工品质形成中的作用奠定了基础。
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