摘要
本文主要从以下几个部分展开论述： 第一部分:泛素特异性肽酶22在胃癌中的表达及其临床意义 目的:研究胃癌组织中泛素特异性肽酶22(USP22)的表达及意义。 方法:使用免疫组化 SABC法检测146例标本(100例胃癌、46例癌旁正常组织)中USP22的表达情况,并将表达情况与病例的临床病例资料相联系。 结果:胃癌组织中USP22的阳性率为80%,阳性表达率明显高于正常组织。胃癌的分期与阳性表达呈正相关,胃癌的分化程度与阳性表达呈负相关。 结论:USP22可能是胃癌新的分子标志物。 第二部分:SiRNA沉默 USP22基因对胃癌细胞增殖的抑制作用 目的:研究胃癌细胞中沉默泛素特异性肽酶22(ubiquitin specific peptidase22, USP22)的表达后其增殖的影响。 方法:设计三条 siRNA及阴性 siRNA针对 USP22基因,采用脂质体 Lipofectamine2000转染胃癌 AGS细胞,Realtime-PCR检测转染后 AGS细胞中USP22 mRNA表达水平;Western-blot检测转染后 AGS细胞中USP22蛋白质表达水平的变化情况;采用流式细胞术检测细胞周期分布变化;采用CCK8法检测细胞增殖率及抑制率。 结果:在转染48小时后,三段干扰的片段都能分别在 mRNA和蛋白水平上有效的抑制USP22的表达,其中转染 USP22 siRNA3后效果最明显,USP22的mRNA表达下降了80.47%±2.99%;USP22的蛋白质表达下降了79.40%±3.58%。细胞增殖明显受到抑制,USP22 siRNA3组胃癌细胞增殖抑制率为27.33%±3.49%。细胞周期的检测中G0/G1期细胞增多;S期细胞减少。 结论:采用siRNA干扰技术可以有效的下调 USP22基因的表达;显著抑制胃癌AGS细胞的增殖。
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