摘要
第一部分 四氮盐(XTT)减低法定量分析氨溴索对白假丝酵母菌生物膜形成过程的干预作用 目的：用四氮盐（XTT）减低法定量分析氨溴索对体外白假丝酵母菌(Candidaalbicans,C.albicans)生物膜(biofilm,BF)形成过程的抑制作用。 方法：用微孔板法建立体外不同时间段的白假丝酵母菌ATCC10231BF模型；采用甲基四氮盐（theabatedtetrazoliumsalt,XTT）减低法定量评价氨溴索对不同时间段的白假丝酵母菌BF的抑制作用；银染后，倒置显微镜下观察该药对白假丝酵母菌成熟BF的形态学影响。 结果：在96孔微量细胞培养板上成功建立白假丝酵母菌90min、24h、48hBF模型。0（空白对照组）、0.25mg/ml、1.5mg/ml的氨溴索干预90min的白假丝酵母菌BF，作用8h后，XTT减低法测OD450的值分别为2.18±0.10、1.91±0.14、0.59±0.11；相同浓度的氨溴索干预24h的BF后，OD450的值分别为3.16±0.15、2.83±0.11、1.08±0.15；相同浓度的氨溴索干预48h的BF后，OD450的值分别为3.23±0.10、2.92±0.11、1.21±0.12；相同时间段的BF，组间比较有显著性差异（P＜0.05）。利用银染法可观察到氨溴索干预白假丝酵母菌成熟BF后，呈密集针织样网状结构的BF其结构变得疏松，部分网状结构断裂，且1.5mg/ml的氨溴索较0.25mg/ml的氨溴索干预效果更明显。 结论：氨溴索对体外不同时间段的白假丝酵母菌BF均有抑制作用，且在一定药物浓度范围内随着该药药物浓度的增加，对BF的抑制作用显著增强。银染法可以定性观察氨溴索对白假丝酵母菌成熟BF的影响。 第二部分 氨溴索对白假丝酵母菌生物膜形成过程的影响及结构定量化分析 目的：利用激光共聚焦显微镜（ConfocalLaserScanningMicroscopy，CLSM）观察氨溴索对白假丝酵母菌ATCC10231菌株BF形成过程的影响，并用图像结构分析软件（ImageStructureAnalyzer,ISA）对BF结构参数进行定量分析。采用ImageProPlus6.0分析软件分析氨溴索对BF内白假丝酵母菌死亡率的影响。 方法：置片法培养90min、24h和48h的白假丝酵母菌ATCC10231菌株BF模型，分别将其分为3组，为空白对照组、氨溴索0.25mg/ml组、氨溴索1.5mg/ml组，药物作用8小时。在空白对照组中，用FITC-ConA染色后在荧光显微镜下观察BF的动态形成过程。通过荧光探针SYTO9/PI标记，利用CLSM动态观察氨溴索干预后，对BF形成过程的影响，并应用ISA软件对BF结构参数进行定量分析。采用ImageProPlus6.0软件分析氨溴索干预后，BF内白假丝酵母菌的死亡率。 结果：在空白对照组，运用荧光显微镜可观察到生长在玻片上呈绿色点片状的BF，随着培养时间的延长绿色荧光增多增强，逐渐形成针织网状结构。ISA软件定量分析显示：在空白对照组中，随着培养时间的延长，BF逐渐变厚，平均扩散距离（AverageDiffusionDistance,ADD）和结构熵（TextualEntropy,TE）呈增加的趋势，区域孔率（ArealPorosity,AP）呈下降趋势。分别用0.25mg/ml和1.5mg/ml氨溴索干预90minBF、24hBF和48hBF，作用8h后与空白对照组相比，BF厚度、ADD和TE均减少（P＜0.05），AP增加（P＜0.05）。IPP软件分析显示：分别用0.25mg/ml和1.5mg/ml氨溴索干预90minBF、24hBF和48hBF，作用8h后与空白对照组相比，BF内白假丝酵母菌死亡率增加（P＜0.05）；高浓度组（1.5mg/ml）与低浓度组（0.25mg/ml）相比，高浓度组BF内白假丝酵母菌死亡率增加更明显（P＜0.05）。 结论：ISA软件可以对氨溴索对白假丝酵母菌ATCC10231菌株BF的形成过程进行定量分析。氨溴索干预各个时间段白色念株菌BF后，BF空间结构破坏和BF内死菌比例增加。且在一定浓度范围内，高浓度氨溴索干预BF后，其空间结构破坏和白假丝酵母菌死亡比例增加更明显。
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