摘要
β-葡萄糖苷酶，又称β-D-葡萄糖苷水解酶(EC3.2.1.21)，能特异性地催化低聚糖（通常2-6个单糖残基）、烷基和芳香族烃基末端非还原性的β-D-葡萄糖苷键的水解。β-葡萄糖苷酶是纤维素酶系中的关键限速酶。获得比活高，产量大，热稳定性好的β-葡萄糖苷酶，一直是研究纤维素酶水解纤维素的热点问题。 本研究从耐热子囊菌和嗜热脱氮地芽孢杆菌中克隆到四种β-葡萄糖苷酶基因tabgl、gebgl1、gebgl2和gebgl3，并将它们构建到不同的表达载体pRX2和pGEX-2LT上，转化大肠杆菌BL21(DE3)，构建出七种β-葡萄糖苷酶工程菌，且均实现了它们在大肠杆菌中的表达。 通过对工程菌BL21(pGEX-gebgl1)表达纯化出的β-葡萄糖苷酶酶学性质的研究发现，该重组酶的最适温为60℃-70℃，最适pH值为7.0。该酶在60℃下至少能稳定存在4h，在pH5-10的缓冲液中孵育4小时，酶活力仍能维持在90％以上。该酶在880mM的高离子强度下仍能发挥其功能，经纯化后的纯度可达90％。 测活结果显示，工程菌BL21(pGEX-gebgl1)重组表达的β-葡萄糖苷酶在磷酸钾缓冲液中，酶比活力为0.0058IU/mg，当加入柠檬酸缓冲液和10mMAl3+时，酶比活力可达到0.043IU/mg。聚合状态分析发现该酶具有多种寡聚体形式，并对不同寡聚体进行比活力测定，结果显示这些寡聚体均有β-葡萄糖苷酶活性。
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