摘要
本文以枸杞为原料，研究枸杞多糖的分离纯化工艺、组成结构及对人肝癌细胞SMMC-7721的细胞凋亡诱导活性的研究。 枸杞多糖醇沉的最佳条件为:50mL水提液加入95％乙醇80mL，室温醇沉12小时，反复醇沉5次。最佳的脱色条件为多糖溶液∶氯仿∶正丁醇=25∶5∶1(v/v/v)。枸杞多糖得率为0.92(g/100g)，换算因子为1.85。DEAE纤维素可以将枸杞多糖分为6个组分，收集LBP-4和LBP-5，用SephedexG-75进行纯化，经纯度检验，结果表明表明LBP-4和LBP-5都是均一的多糖组分。 经HPLC检测得出LBP-4的数均分子质量(M)n为866130D，LBP-5的(M)n为1412100D。LBP-4中性糖、半乳糖醛酸、蛋白质含量分别为71.2％、16.0％、2.10％，LBP-5为67.3％、23.2％、3.1％。通过气相色谱得出LBP-4由岩藻糖、核糖、鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、葡萄糖、甘露糖、半乳糖组成，摩尔比为13.0∶1.0∶19.2∶4.2∶1.1∶4.1∶14.3∶9.5;LBP-5由岩藻糖、鼠李糖、阿拉伯糖、葡萄糖、甘露糖、半乳糖组成，其摩尔比为3.2∶5.1∶1.0∶20.5∶2.0∶26.4。刚果红实验结果表明两种多糖不具有三股螺旋结构。β消去实验表明枸杞多糖的糖链与肽链之间是O-型连接。通过高碘酸氧化和Smith降解结果表明:枸杞多糖均含有较多的1-3、1-4糖苷键。紫外光谱结果表明:枸杞多糖不含核酸，蛋白质含量较低。红外光谱结果表明两种多糖中可能含有-OH、-NH2、-NH-、-CH2、-C=O、-CO-、-C-O、-COOH等基团。电镜扫描结果表明:枸杞多糖呈松散的片状和束状结构。原子力显微镜观察结果表明:枸杞多糖分子聚集在一起呈大小不一边缘不规则的球状或岛屿状。 MTT实验表明两种多糖对SMMC-7721细胞的生长均有一定的抑制作用，LBP-5抑制细胞生长的作用更强。倒置显微镜及激光扫描共聚焦显微镜进行形态学观察结果表明:枸杞多糖作用人肝癌细胞SMMC-7721，细胞发生明显的凋亡现象。流式细胞仪结果表明:LBP-4使SMMC-7721细胞的细胞周期阻滞于G0/G1期，LBP-5使SMMC-7721细胞的细胞周期阻滞于S期。
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