摘要
目的:观察电针刺激“足三里”、“曲池”穴对大鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用及应用PI3K/Akt信号转导通路抑制剂LY294002,深入探讨电针的神经保护作用与PI3K/Akt信号转导通路的关系。 方法:本研究采用Zea Longa线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)缺血再灌注模型，缺血2h后再灌注3d。将60只健康成年SD大鼠随机分为假手术组(SC)12只、造模组48只[MCAO模型组(IC)、MCAO+电针组(EA),MCAO+电针+溶剂组）(DMSO)，MCAO+电针+抑制剂组(LY294002)]:溶剂、抑制剂(10Mn10ul)于造模前30min脑立体定位仪下经侧脑室注射，缺血再灌注2h后行神经行为学评分，剔除死亡及不合格者，区组随机分组为:IC组10只,EA组11只，DMSO组11只,LY294002组12只。术后24h开始针刺“足三里”、“曲池”穴，再通以电针治疗仪予疏密波(1-20Hz)治疗30min，1次/天，直到3天后动物处死。采用Zealonga5分评价方法观察脑缺血再灌注后大鼠神经功能缺损恢复程度:TTC脑组织染色法计算脑梗死体积：DeadEndTM荧光标记TUNEL法观察皮质区缺血周围神经细胞凋亡的情况:应用蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测脑组织中PI3K、Akt、p-Akt、bad、p-bad、Bcl-2，Bax蛋白表达水平:逆转录PCR技术（RT-PCR技术）检测大脑bad、Bcl-2,Bax的mRNA表达:运用免疫组化方法观察皮质区缺血周围cleaved caspase-3的表达强度。各实验数据以均数±标准差表示，应用SPSS16.0统计软件处理分析。 结果:神经功能评分显示缺血再灌注72h后,电针组、电针+DMSO组的神经行为学评分分别和模型组、电针+DMSO+LY294002组比较有显著性差异(P＜0.05);TTC染色法显示电针治疗减少了脑梗死体积(P＜0.05)，与模型组、电针+DMSO+LY294002组比较统计有显著差异（P＜0.05）;说明电针“曲池”、“足三里”穴能有效地改善大鼠脑缺血后神经功能障碍，减小脑缺血再灌注大鼠脑梗死体积，PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002的介入抑制了电针的作用。电针治疗穴减弱了缺血再灌注大鼠皮质区缺血周围神经细胞凋亡，这种抗凋亡作用被LY294002阻断。与假手术组相比.模型组的凋亡细胞明显增加，电针治疗后凋亡阳性细胞数大大减少，两组比较有统计学差异(P＜0.01)，此外电针组凋亡阳性细胞数明显少于抑制剂组，差异有显著性意义(P＜0.01)。电针治疗提高了PI3K、p-Akt的蛋白表达及p-bad、Bcl-2的蛋白表达和mRNA表达;并且抑制了Bax的表达水平（P＜0.05);电针组的cleaved caspase-3免疫阳性细胞极明显少于模型组，LY294002部分的减少了电针抑制caspase-3的活化。所有的结果数据在电针组与电针+溶剂组均未发现明显差异:说明电针治疗通过激活PI3K/Akt信号通路并调节其下游凋亡相关因子，以此发挥其抗凋亡的神经保护作用。 结论:PI3K/Akt信号转导通路参与了电针干预“足三里”、“曲池”穴对脑缺血再灌注损伤的神经保护作用。
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