摘要
对虾白斑综合症病毒(whitespotsyndromevirus，WSSV)是一种严重危害对虾养殖业发展的病原。本研究通过人工感染螯虾活体实验，筛选得到三株(高毒株WSSV-CN01，中毒株WSSV-CN02和低毒株WSSV-CN03)毒力差异较大的病毒株。利用Real-timePCR分析了不同毒株在螯虾体内的复制情况，发现毒株毒力高低与病毒的增殖量无相关性。高毒株和中毒株感染的螯虾血淋巴细胞数量显著低于低毒株感染组和对照组。进一步实验证明，血淋巴细胞数量下降有两方面原因:(1)WSSV感染能引起血淋巴细胞死亡;(2)WSSV感染可能破坏造血组织，影响造血功能。不同毒株感染后，螯虾血淋巴中血蓝蛋白含量无显著差异，酚氧化酶活性和过氧化物酶活性存在显著差异。 为了洞悉造成不同病毒株毒力差异的分子机制，三株病毒(WSSV-CN01，-CN02和-CN03)的全基因组序列被测定。通过序列比对，与高毒株相比，低毒株和中毒株中分别缺失了18个和12个基因，其中包括四个囊膜蛋白基因和一个极早期基因。体外实验证明，低毒株入侵原代造血组织细胞能力减弱。低毒株和中毒株缺失基因在昆虫细胞HighFive中表达，发现其中四个基因可能影响细胞分裂。 结构蛋白VP95在病毒囊膜和核衣壳中均有分部，能自身形成二聚体和三聚体。经高盐溶液处理，核衣壳中大部分的VP95脱落，同时溶液变得黏稠。电镜观察高盐处理的核衣壳，其形态依然保持杆状，平端完整，只是在圆端出现一个门户(portal)，并且病毒遗传物质DNA从这个门户喷出。免疫金标定位发现，VP95就位于门户处。进一步研究显示VP95也定位在完整病毒粒子的类尾结构内，而类尾结构与基因组喷发的门户处于同一端。根据这些实验证据，我们推导了VP95的功能:VP95在核衣壳的圆端形成了一个供遗传物质导出的门户，由VP95聚合体形成的一个“塞子”结构，将门户塞住，而且这个“塞子”的延伸部分经囊膜包裹形成了类尾结构。另外，RNAi实验证明，转染vp95-dsRNA影响了细胞中vp95的转录水平，干扰了子代病毒粒子产生。 总之，开展病毒毒力与免疫防御之间关系的研究是了解病毒致病机理的重要依据，毒力基因的筛选和确定有助于更好的预防和控制病毒性疾病的爆发;对病毒结构蛋白功能的研究也有助于揭示病毒的组装机制。
NETL