摘要
鳄鱼骨中含有大量的胶原蛋白，鳄骨胶原多肽是将鳄骨胶原水解得到的具有特殊生理功能的一系列多肽的总称。本论文通过选择蛋白酶酶系和控制酶解过程，制备优质骨胶原多肽，以期获得良好的经济效益和社会效益。 本论文以加工废弃物鳄鱼骨为原料，提取酸溶性胶原蛋白(ASC)，并对其部分理化性质进行检测。通过紫外全波长扫描分析，鳄骨胶原蛋白在220nm处有一个强吸收峰，符合胶原蛋白特性;SDS-PAGE电泳结果表明，鳄骨胶原蛋白至少包含β、α1和α2链;样品的氨基酸组成为典型的胶原蛋白的氨基酸组成。 以鳄鱼骨为原料，采用单因素试验优化水解条件，制备高生理活性的骨胶原蛋白多肽。结果表明，其制备的最佳酶解工艺条件为:采用木瓜蛋白酶作为水解酶，在维持自然状态的pH（大约为7.5）下，水解时间4h，酶与底物浓度比例(E/S)为1.6％，温度55℃。经分析所制备的骨胶原多肽氨基酸种类丰富，其中羟脯氨酸含量达12.38％，并含有钙、钾、镁和钠等多种对人体有益的金属元素。分析不同浓度的鳄骨胶原蛋白多肽的抗氧化活性，结果显示:鳄骨胶原蛋白多肽对DPPH和羟自由基清除率的IC50分别为1.33mg/mL和11.6mg/mL，多肽浓度为2mg/mL时，相对还原力为620％。研究了鳄骨胶原多肽对小鼠红细胞、肝线粒体、正常组织匀浆脂质过氧化的抑制作用，结果表明:其对这三个体系丙二醛(MDA)的生成均具有较强的抑制作用。鳄骨胶原多肽经SephadexG-25分离得到P2，抗氧化能力比原液有较大提高，对DPPH的半清除率为0.17mg/mL，浓度为1.0mg/mL时具有较好的保护体外DNA氧化损伤的作用。采用动力学研究发现P2对酪氨酸酶有较强的抑制作用，IC50为175μg/mL，抑制作用表现为混合型可逆抑制，且不会抑制B16黑色素瘤细胞的增殖，是一种安全无毒副作用的潜在美白添加剂。 以鳄鱼骨为原料制备降血压肽，以对血管紧张素转化酶(ACE)的抑制率为指标，采用单因素试验优化水解条件，得最佳水解条件为:采用碱性蛋白酶作为水解酶，水解时间为4h，酶与底物比例(E/S)1.0％。经SephadexG-25分离得到M3，其抑制ACE的IC50为1.74mg/mL，较原液提高了3.4倍。通过ACE抑制动力学研究发现M3为反竞争型抑制剂。通过模拟胃肠道消化稳定性试验，发现消化酶处理前后骨胶原肽M3的ACE抑制率变化不显著，表明其具有消化酶稳定性。
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