摘要
目的: 探究木犀草素是否具有治疗酒精性脂肪肝作用，并研究木犀草素对慢性Lieber-DeCarli液体粮食诱导的C57BL/6小鼠体重、肝脏毒性、血脂、肝脏TG、肝脏病理形态的影响;通过体外酒精肝细胞模型探讨木犀草素改善酒精性脂肪肝的作用机制，为临床试验木犀草素治疗酒精性脂肪肝提供基础。 方法: 1.C57BL/6小鼠按照体重随机分为3组，采用慢性Lieber-DeCarli液体粮食诱导模型从1％，2％，4％后，维持5％乙醇直到实验结束。从酒精诱导开始，除给药组每天灌胃木犀草素(50 mg kg-1)外，其余两组分别灌胃相应的蒸馏水。最后一天按5g/kg体重给小鼠灌胃30％的酒精，对照组灌麦芽糖水溶液。9小时后处死小鼠并解剖取组织。 2.在酒精粮食诱导2周后，对血清生化指标、肝脏TG、TC含量、肝组织H&E染色和油红染色进行分析。使用Real-time PCR检测技术，观察肝组织中与脂质代谢相关转录因子靶基因的表达水平。 3.建立体外酒精肝细胞模型（100mM EtOH，刺激36h，密封培养板），通过测定酒精诱导后细胞TG含量以及BODIPY染色来确定木犀草素的体外药效。 4.利用双荧光素酶报告基因检测木犀草素是否为SREBP的影响，使用RT-PCR检测技术，观察AML-12细胞中与脂质代谢相关转录因子靶基因的表达水平，并且使用Western Blot技术，检测木犀草素发挥改善酒精性脂肪肝作用是否通过AMPK/SREBP通路。 结果: 1.对慢性Lieber-DeCarli液体粮食诱导的C57BL/6小鼠血清生化指标分析，木犀草素具有降低肝脏毒性，缓解酒精引起的血脂紊乱的作用，表现为血清ALT(P＜0.05)、总甘油三酯(P＜0.01)、低密度脂蛋白胆固醇（P＜0.01）均显著下降，表明木犀草素具有改善酒精肝作用。 2.对慢性Lieber-DeCarli液体粮食诱导的C57BL/6小鼠肝脏指标分析，木犀草素降低了肝脏TG含量（P＜0.01），并且能够改善肝组织病理形态，减少肝组织切片中的空泡数目，降低肝组织中的脂滴积累，提示木犀草素具有改善酒精性脂肪肝作用。 3.通过RT-PCR实验表明木犀草素降低了SREBP-1c和SREBP-2及其下游靶基因的表达水平，并且木犀草素通过降低炎症因子的表达水平进而发挥抗炎作用也得到了验证。 4.通过建立体外酒精肝细胞模型，木犀草素降低了细胞中TG含量(P＜0.01)，并且减少了细胞中脂滴的积累，表明木犀草素在体外同样有改善酒精性脂肪肝作用。 5.通过检测报告基因显示木犀草素可以降低SREBP的转录活性;通过RT-PCR实验表明木犀草素可以降低SREBP-1c以及SREBP-2靶基因的表达水平;通过Western Blot实验表明木犀草素改善酒精性脂肪肝的机制可能是通过AMPK/SREBP通路。 结论: 1.木犀草素可以改善由慢性Lieber-DeCarli液体粮食诱导的肝损伤，并且可以缓解酒精性脂肪肝症状。 2.木犀草素改善脂质代谢可能是通过磷酸化AMPK从而磷酸化SREBP-1c，最终抑制脂肪合成。
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