摘要
目的: 探讨大蒜素联合长春新碱对膀胱癌BIU-87细胞增殖和凋亡的影响,并进一步探讨大蒜素联合细胞周期特异性化疗药物的作用机制。 方法: (1)实验分为大蒜素组、长春新碱组、大蒜素联合长春新碱组,以未用药物处理的BIU-87细胞为空白对照组,其中大蒜素抑制膀胱癌BIU-87细胞50%的药物浓度(IC50)为76.26mg/l,长春新碱抑制膀胱癌BIU-87细胞50%的药物浓度(IC50)为2.34mg/l; (2)应用CCK-8法测定膀胱癌BIU-87细胞经过处理后的细胞增殖抑制情况; (3)应用RT-PCR法检测BIU-87细胞内CDK1和CyclinB1mRNA的表达情况; (4)应用免疫细胞化学法从形态上半定量检测细胞内CDK1和CyclinB1蛋白的表达情况; (5)应用Western blot定量检测细胞内CDK1和CyclinB1蛋白的表达情况; (6)应用AnnexinV/PI双染法流式细胞术检测各组细胞凋亡的百分比。 结果: (1)膀胱癌BIU-87细胞的增殖抑制率随大蒜素和长春新碱浓度的增高而增加,具有剂量反应关系(P<0.01);同时能诱导细胞凋亡,联合用药组凋亡率达(54.89±0.27)%,与空白对照组、大蒜素组、长春新碱组比较差异均有统计学意义(P<0.05); (2)RT-PCR结果显示,药物处理48h后的BIU-87细胞CDK1mRNA表达水平均下调,其中联合组(0.15±0.03)%下调最明显(P<0.01),与空白对照组(0.81±0.05)%、大蒜素组(0.72±0.02)%、长春新碱组(0.57±0.01)%比较差异有统计学意义(P<0.05);药物处理48h后的BIU-87细胞CyclinB1mRNA表达水平也均下调,其中联合组(0.12±0.01)%下调最明显(P<0.01),与空白对照组(0.83±0.02)%、大蒜素组(0.68±0.05)%、长春新碱组(0.49±0.02)%比较差异有统计学意义(P<0.05); (3)免疫细胞化学染色结果分析显示:CDK1蛋白在空白对照组、大蒜素组、长春新碱组和联合用药组中IOD分别为(58361.39±1425.03)、(43444.52±870.51)、(19888.49±608.66)、(12778.12±1024.78),联合用药组与空白对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);CyclinB1蛋白在空白对照组、大蒜素组、长春新碱组和联合用药组中IOD分别为(84467.69±8711.08)、(59278.34±7002.85)、(36211.90±5608.84)、(17797.86±2264.12),联合用药组与空白对照组相比差异有统计学意义(P<0.05); (4)Westernblot分析结果发现,大蒜素联合长春新碱能有效地降低膀胱癌BIU-87细胞株CDK1和CyclinB1蛋白的表达,使CDK1蛋白表达从空白对照组(1.84±0.14)降低到联合用药组的(1.10±0.12),CyclinB1蛋白表达从空白对照组(2.85±0.18)降低到联合用药组的(1.78±0.10),与其余3组相比,联合用药组CDK1和CyclinB1蛋白表达水平均明显下调(P<0.05)。 结论: (1)大蒜素和长春新碱对膀胱癌细胞的生长均有明显的抑制作用,且呈浓度依赖性;并出现细胞凋亡,联合用药组凋亡率达(54.89±0.27)%,表明大蒜素能增强长春新碱对膀胱癌BIU-87细胞株的杀伤作用,从而诱导细胞凋亡; (2)大蒜素联合长春新碱能有效地降低膀胱癌BIU-87细胞株CDK1和CyclinB1mRNA的表达,并使相应的蛋白表达降低。
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