摘要
同一种元素或化合物在不同条件下生成结构、形态、物性完全不同的晶体的现象称为多晶现象。而药物不同固态晶格中的不同填充、排列方式将影响药物在人体内吸收的速度和程度，进而导致临床药效的差异。晶型是影响药物生物利用度的最主要因素之一，也正因此优化制剂工艺、优化结晶条件，研究药物晶型与生物利用关系成为近年来药物制剂领域研究的热点和焦点。 美托拉宗，一种利尿剂，最早于1974年由美国Pennwalt公司制造在英国和美国上市，随后，在德、意、日、瑞士和阿根廷等许多国家上市，在临床使用已达三十年，被美国药典23、24、25版收载。美托拉宗的商品名为Zaroxolyn?或Diulo?(规格：2.5mg、5mg、10mg)；2001年8月10日，由FDA批准CelltechPharmaceuticals.Inc公司生产Mykrox?(规格：0.5mg)并上市。两种产品的最主要的区别是新产品使用的美托拉宗原料的晶型与早期生产的原料不同，所以Mykrox吸收快，其生物利用度与Zaroxolyn?和Diulo?相比有明显的提高；Mykrox?达峰浓度时间是2～4h，而美托拉宗的其他规格达峰浓度时间是8h。Mykrox?的优点是半衰期、作用时间较长，分别达8h、12～24h；而且不抑制碳酸酐酶，从而不影响H+和氨的分泌，血氨降低；对肾功能不全病人，其与吲达帕胺要比其它噻嗪类药物略胜一筹。 正是由于美托拉宗的上述优点，本课题组与西安力邦制药有限公司合作共同开发了美托法宗片(规格：0.5mg)，其小试、放大工艺成熟稳定，且无知识产权限制，产品质量达到美国药典要求，现已获得临床研究批件。本次试验目的是优化美托拉宗生产工艺及结晶条件，考察美托拉宗不同晶型与生物利用度的关系，阐明其在中国人体内吸收、分布、代谢、排泄的规律，为美托法宗Ⅱ期临床试验的给药方案提供依据。 一、美托拉宗合成及结构鉴定 目的：探索美托拉宗合成路线，并对美托拉宗结构及晶型进行确证。 方法：以2-甲基-5氯苯胺为起始原料，经乙酰化、氯磺化、氨解、氧化、缩醛反应制得美托拉宗。并采用红外光谱（IR）、核磁共振氢谱（NMR）、质谱（MS）、示差扫描量热法等方法对其结构及晶型进行确证。 结果：最后美托拉宗的回收率为84.5％，物料基本平衡。元素分析结果显示：分子中原子个数比C:H:N:S:Cl:O=16:16:3:1:1:3得美托拉宗最简化式为C16H16N3SClO3，式量为365；由MS得美托拉宗分子量为365，故可知美托拉宗最简化式即为分子式。计算分子中不饱和度Ω为10与分子中存在6个双键、3个环、1个羰基相符合。IR分析结果显示：美托拉宗分子结构中主要官能团有苯环、羰基、氨基、磺酰基、氯原子等，IR图谱中各官能团特征吸收明显，与美托拉宗结构相符。NMR分析结果显示：从美托拉宗结构上看，存在1个手性碳原子，加上二氢嘧啶酮环的椅式构型反转造成的构象异构，分子中各C、H原子化学环境复杂，仅从13C-NMR、1H-NMR图谱不易分解，结合DEPT、HMBC、HMQC等联合进行解析，确认为美托拉宗分子的C、H分布。MS分析结果看MS图谱中得到的美托拉宗分子离子峰[M+]365，主要裂解发生在苯环及二氢嘧啶酮环上，裂解途径与美托拉宗分子结构相符。 结论：本研究室合成的美托拉宗纯度较高，产率较高，具有产业化前景，且IR、NMR、MS对美托拉宗结构进行解析，并与国外对照品进行了比对，可确认结构为7-氯-1,2,3,4-四氢-2-甲基-3-(2-甲基苯基)-4-氧代-6-喹唑磺酰胺。 二、液相色谱-串联质谱法测定血桨中美托拉宗浓度及其药动学的应用 目的：建立快速、灵敏的液相色谱-串联质谱血浆中定性定量检测方法，并基于此方法研究美托拉宗片单次及多次给药后在中国健康人体内的药代动力学特征，为制订美托拉宗Ⅱ期临床试验的给药方案提供依据。 方法：选用AgilentTC-C18(5μm,4.6×150mmID,Aglient)的色谱柱，流动相为甲醇-去离子水（70:30，V/V）；流速为0.5ml·min-1，柱温：35℃，三重四极杆质谱以多反应监测方式进行检测。检测离子为：美托拉宗，[M-H]-离子，m/z364.1→257，氢氯噻嗪，[M-H]-离子，m/z296.2→269.1。30名健康受试者随机分为3组，每组10人，分别参加美托拉宗单次（0.5mg、1mg、2mg），在给药后的0.5、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、8.0、12.0、24.0、36.0、48.0h分别采集静脉血约5ml,离心分离出血浆置无菌试管中，置于-80℃冰箱中保存，用HPLC/MS/MS法测定血浆中美托拉宗的浓度，计算药动学参数。单次给药中剂量组继续参加多次药代动力学（1mg）研究。 结果：美托拉宗线性范围为0.050-100.0ng·ml-1；低、中、高三个浓度质控批内精密度为3.5～8.9%，批间精密度为5.7～8.5%，准确度为93.4～110.8%；提取回收率为70.5～72.6%。口服美托拉宗0.5mg、1mg以及2mg后，美托拉宗的消除半衰期t1/2为6.6±2.8h、7.9±1.2h、7.6±1.9h，AUC0-48为32.9±9.2ng?h?ml-1、122.5±36.3ng?h?ml-1、162.4±26.9ng?h?ml-1，达峰时间Tmax分别为1.6±0.9h、1.6±0.6h以及1.5±1.3h和达峰浓度Cmax分别为6.9±2.6ng?ml-1、20.6±4.8ng?ml-1以及36.8±7.1ng?ml-1。多次口服美托拉宗，稳态平均血药浓度Cssav为9.7±1.8ng?ml-1，稳态血药浓度波动度DF为2.1±0.3，蓄积常数R为74.9±5.2%，消除半衰期t1/2为8.9±1.4h，MRT为8.5±1.0h，AUC0-τ为(156.8±31.6)ng?h?ml-1，达峰时间Tmax和达峰浓度Cmax分别为2.4±1.4h和22.4±5.0ng?ml-1。 结论：在0.5～2mg剂量范围内美托拉宗的AUC(0-48)、Cmax均与剂量呈一定线性关系。连续7天给药，体内无蓄积。推荐临床剂量为0.5mg，每天1次，如疗效欠佳，增大剂量为0.5mg，每天2次。 三、高效液相色谱荧光法测定尿液中美托拉宗及其药动学的应用 目的：建立快速、灵敏的液相色谱法尿液中美托拉宗定量检测方法，并基于此方法研究美托拉宗片单次给药后在中国健康人体内的药动学特征，为制订美托拉宗Ⅱ期临床试验的给药方案提供依据。 方法：选用AgilentTC-C18(5μm,4.6×150mmID,Aglient)的色谱柱，流动相为甲醇-去离子水（43:57，V/V）；流速为1.0ml·min-1，柱温：35℃；荧光检测器检测，美托拉宗：激发波长235nm，发射波长410nm；地西泮：激发波长235nm，发射波长354nm。30名健康受试者随机分为3组，每组10人，分别参加美托拉宗单次（0.5mg、1mg、2mg）研究，收集单次给药前(0h)及服药后0-2、2-4、4-6、6-8、8-10、10-12、12-16、16-24、24-48h各时间段所有尿液，记录各时段尿量后，留取3ml尿样于-80℃避光保存待测。 结果：美托拉宗线性范围为0.2-500.0ng·ml-1；低、中、高三个浓度质控批内精密度为6.9～11.7%，批间精密度为6.9～11.0%，准确度为100.3～108.8%；提取回收率为77.9～81.7%。单次口服美托拉宗0.5mg、1mg、2mg后48小时的美托拉宗平均尿药累积排泄率(%)分别为59.7±16.4%、61.1±24.3%和62.3±14.4%，估算美托拉宗的消除半衰期t1/2为8.6±2.6h、9.2±2.0h、7.4±0.9h。 结论：健康受试者单次口服0.5mg、1.0mg、2.0mg西安力邦制药有限公司研制的美托拉宗后，其在低、中、高三个剂量组的消除半衰期及体内平均驻留时间相近；在0.5～2mg剂量范围内美托拉宗的累积排泄率相近，初步表明0.5～2mg剂量范围内药物在体内为线性代谢。
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