摘要
目的:探讨浸润性CD11b+CD15+粒细胞在人胃癌微环境中免疫抑制功能及其机制。 方法: 1.根据目前研究进展以CD11b和CD15作为表面标志,分离胃癌及癌周组织中浸润的粒细胞,利用流式细胞技术检测人类临床胃癌组织浸润的CD11b+CD15+粒细胞比例;并检测中性粒细胞的表型变化(HLA-DR的表达是否下调)。 2.利用免疫磁珠粒细胞分选试剂盒(阴性选择)和CD15阳性分选试剂盒,分选胃癌组织及癌周组织浸润的粒细胞;与正常人外周血来源T细胞体外共培养5天,并利用流式细胞仪分析测定对T细胞免疫抑制能力。 3.利用免疫磁珠法分选正常人外周血中性粒细胞,加入免疫抑制性分子IL-10,并用anti-CD3和anti-CD28刺激粒细胞3天,再与T细胞共培养3天后,利用流式细胞仪分析测定对T细胞免疫抑制能力;并阻断精氨酸酶I,观察粒细胞对T细胞免疫抑制能力变化情况。 4.收集不同共培养体系中上清液,用ELISA测定上清中ARG-I浓度,以证实肿瘤组织中浸润粒细胞及通过IL-10诱导的外周血粒细胞可以通过ARG-I抑制T细胞活化。 结果: 1.流式细胞技术检测结果显示:胃癌组织浸润的CD11b+CD15+粒细胞比例较癌周明显增高,比例分别为:(30±5%和4±2%,P<0.05)。分析中性粒细胞的表型变化显示:胃癌组织浸润的CD11b+CD15+粒细胞较癌周HLA-DR的表达明显下调,比例分别为:(40±5%vs8±3%,P<0.05)。 2.利用免疫磁珠粒细胞分选试剂盒分选胃癌组织及癌周浸润的粒细胞;与T细胞体外共培养5天,并流式细胞仪分析测定T细胞细胞因子(IL-2和IFN-γ)及颗粒酶B。结果显示:胃癌组对比癌周组分别是IL-2(10±2%vs50±5%,P<0.05),IFN-γ(8±3%vs48±9%,P<0.05),granzymeB(7±2%vs45±4%,P<0.05)。表明:胃癌来源粒细胞能明显抑制T细胞活化,从而抑制T细胞功能。 3.IL-10诱导粒细胞结果:通过检测细胞因子IL-2、IFN-γ结果显示:IL-2(对照组48±5%vsARG-1阻断组40±3%vsIL10诱导组15±2%,P<0.05),IFN-γ(对照组40±5%vsARG-1阻断组28±4%vsIL10诱导组12±2%,P<0.05)表明:免疫抑制性分子IL-10能够诱导正常人粒细胞具有免疫抑制功能。 4.收集不同共培养体系中上清液,用ELISA测定上清中ARG-I浓度。ELISA结果显示A组肿瘤来源粒细胞组上清中ARG-I的浓度(0.68±0.10ng/ml)和IL10诱导组上清中ARG-I的浓度D组:(0.18±0.03ng/ml),E组:(0.29±0.04ng/ml),F组:(0.54±0.09ng/ml),均明显高于对照组上清中ARG-I的浓度:(0.10±0.02ng/ml)(P<0.05)。以上结果说明:肿瘤组织中浸润粒细胞及通过IL10诱导的外周血粒细胞可以通过ARG-I抑制T细胞功能。 结论: 1.胃癌组织中浸润的CD11b+CD15+粒细胞的比例较癌周明显增高。 2.胃癌组织中浸润的粒细胞具有免疫抑制功能,且其功能主要依赖于精氨酸酶I。 3.肿瘤微环境内免疫抑制性分子IL-10能诱导正常人外周血中性粒细胞具有免疫抑制功能且其功能主要依赖于精氨酸酶I。
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