摘要
Hc38基因位于捻转血矛线虫肠上皮微绒毛上,澳大利亚学者Hartman等(2001)在通过Northern杂交发现该基因在肠上皮微绒毛内呈高丰度表达,进而推测其表达产物是一种与吸血和免疫逃避有关的功能蛋白,为防治捻转血矛线虫病提供可靠的方法。本论文取得的主要研究结果如下: 采用PCR方法从Hc38全长质粒中扩增出保守结构域HcP,并构建真核表达载体pPIC9K-HcP,电转法将其转入毕赤酵母GS115中,采用G418抗性梯度法筛选得到多拷贝重组菌株,甲醇诱导表达,应用SDS-PAGE分析重组蛋白的表达情况,并将表达蛋白用免疫亲和层析柱纯化,将纯化后的表达产物对牛、羊、鸡、兔、鼠的红细胞进行凝集试验,检测其凝集活性;对天然宿主羊的IgG、血红蛋白在体外进行孵育,应用SDS-PAGE检测降解情况。实验结果表明重组的GS115酵母菌株可表达分泌pHcP,其表达在96h达高峰,分泌量可达0.1mg/L,且纯化后的表达产物经Western blot分析,能产生特异的免疫印迹条带,说明表达产物具有良好的反应原性。HcP表达产物对动物红细胞的凝集活性具有种属专一性;对天然宿主羊的IgG、血红蛋白都有降解作用,验证了前期对该基因功能的推测,即与该线虫的吸血和免疫逃避有关。说明本试验在毕赤酵母中成功表达了具有生物学活性的pHcP。
NETL