摘要
目的:缺氧是一种常见的导致血管内皮损伤的病理因素，可通过损伤内皮结构和功能引发多种心血管疾病。因此，积极改善缺氧导致的血管内皮功能受损对防治心血管疾病具有重要意义。 通心络（Tongxinluo，TXL）为纯中药制剂，能有效改善心肌和大脑的缺氧损伤，在临床上广泛应用于治疗心脑血管病。已经证明，通心络能够通过抑制缺氧条件下内皮细胞caspase-3的激活而减少缺氧引起的内皮细胞凋亡，通过PI-3K/Akt/HIF信号通路上调内皮HIF表达，提高血管内皮细胞对缺氧的耐受性。但是，目前通心络对血管内皮细胞氧化应激损伤的保护作用研究尚少。本研究从整体水平观察缺氧对小鼠器官的影响及通心络的改善作用;另一方面在细胞水平上探讨通心络改善内皮细胞缺氧损伤的作用机制，为通心络治疗心血管疾病提供新的实验依据。 方法: 1.C57BL/6J小鼠和昆明小鼠被随机分为对照组，缺氧组和用药组，分别做慢性缺氧实验和急性缺氧组，取小鼠肺组织进行免疫组化染色，观察HO-1、p47-phox和p22-phox表达。 2.培养人心脏微血管内皮细胞，用氯化钴诱导细胞缺氧并用通心络处理后，Western blot和Real-time PCR分别检测HO-1、p47-phox和p22-phox表达，分组给予通心络和氯化钴刺激，Western bolt和Real-time PCR方法分别检测HO-1、p47-phox和p22-phox表达。 结果: 1.氯化钴以时间依赖的方式诱导HO-1、p47-phox和p22-phox表达用200μM的氯化钴刺激内皮细胞不同时间，分别提取总蛋白和总RNA进行Western blot及Rea-time PCR分析。结果表明，氯化钴以时间依赖性的方式诱导HO-1、p47-phox和p22-phox的表达。 2.氯化钴以剂量依赖的方式诱导HO-1、p47-phox和p22-phox表达用不同剂量氯化钴处理内皮细胞12小时，分别提取总蛋白和总RNA进行Western blot及Rea-time PCR分析。结果表明，氯化钴以剂量依赖性的方式诱导HO-1、p47-phox和p22-phox的表达。 3.通心络抑制氯化钴诱导的HO-1、p47-phox和p22-phox表达体外培养的人心脏微血管内皮细胞用通心络预孵育后，再用氯化钴处理。提取细胞总蛋白和总RNA进行Western blot和Real-time PCR分析。结果表明，通心络显著抑制氯化钴诱导的HO-1、p47-phox和p22-phox上调。 4.通心络改善小鼠慢性缺氧损伤小鼠随机分为三组:对照组、缺氧组、治疗组。用免疫组化实验检测通心络对急性和慢性缺氧诱HO-1、p47-phox和p22-phox表达的影响。结果表明，通心络能抑制慢性缺氧诱导的p47-phox和p22-phox的表达上调，对急性缺氧没有显著作用。 结论: 1.氯化钴以时间依赖的方式诱导HO-1、p47-phox和p22-phox表达。 2.氯化钴以剂量依赖的方式诱导HO-1、p47-phox和p22-phox表达。 3.通心络抑制氯化钴诱导的HO-1、p47-phox和p22-phox上调。 4.通心络改善小鼠慢性缺氧损伤。
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