摘要
木质素是维管植物的一种主要组成成分，是植物适应陆地环境的重要特征之一。它严重影响植物材料在造纸工业与畜牧业生产中的应用，因此其生物合成调控的研究引起人们极大关注。4-香豆酸:辅酶A连接酶(4CL1)及肉桂酰辅酶A还原酶(CCR)是木质素生物合成途径中的两个重要关键酶。为了进一步研究毛白杨中的4CL1和CCR的酶学特性，本研究用实验室已构建的原核表达载体pQE31-4CL1、pQE31-CCR及融合双功能酶原核表达载体pQE31-4CL1-CCR和pQE31-CCR-4CL1，经IPTG诱导表达后进行镍柱亲和层析纯化得到蛋白进行活性测定和酶学特性研究;并用HPLC分离纯化得到了CCR的反应底物——香豆酰CoA酯。实验结果表明，单体蛋白酶和融合双功能酶都能在大肠杆菌中高效表达，单独的4CL1酶和CCR酶活性都比较高，测定得到了两种酶的酶学特性参数;融合双功能酶都酯具有4CL1活性而不具有CCR活性，可能是蛋白在表达后没有折叠成正确的具有催化活性的结构;制备并分离纯化的香豆酰CoA酯浓度和纯度均能达到后续的实验要求。
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