摘要
目的:从余甘子叶的50％乙醇提取液的乙酸乙酯部位中分离出抗肿瘤的活性成分和探讨其抗肿瘤作用机制。 方法:1.将余甘子叶分别用95％乙醇和50％乙醇进行渗漉提取后，取50％乙醇浸膏再分别用石油醚、氯仿、乙酸乙酯进行部位分离，利用硅胶柱层析法对乙酸乙酯部位进行分离纯化，得到纯结晶化合物结晶Ⅰ和结晶Ⅱ;2.在体外实验，采用MTT法、细胞集落形成法测定结晶Ⅰ和结晶Ⅱ对人肝癌细胞株Bele7404、宫颈癌细胞株Hela、人胃癌细胞株SGC7901、黑色素瘤细胞株B16、白血病细胞株P388D1、小鼠肝癌细胞株H22和小鼠肉瘤细胞株S180的生长抑制情况，并用小鼠脾淋巴细胞对结晶Ⅰ与结晶Ⅱ进行免疫毒性测试，为下一步的研究奠定基础;3.在体内动物实验，建立S180小鼠实体瘤、腹水瘤和H22小鼠实体瘤、腹水瘤模型，观察结晶Ⅰ对小鼠实体瘤抑瘤率和腹水瘤生命延长率的影响;4.采用瑞氏和吉姆萨混染法、吖啶橙染色法观察结晶Ⅰ和结晶Ⅱ对肿瘤细胞凋亡的影响;用FCM法观察结晶Ⅰ和结晶Ⅱ对肿瘤细胞凋亡及细胞周期的影响，初步探讨其抗肿瘤作用机制。 结果:1.本实验采用柱层析法，用不同比例的石油醚-乙酸乙酯进行梯度洗脱，分离纯化得到两个有效成分结晶Ⅰ与结晶Ⅱ;2.结晶Ⅰ与结晶Ⅱ可抑制人肝癌细胞株Bele7404、宫颈癌细胞株Hela、人胃癌细胞株SGC7901、黑色素瘤细胞株B16、白血病细胞株P388D1、小鼠肝癌细胞株H22和小鼠肉瘤细胞株S180等7种不同组织来源的肿瘤细胞株的增殖，结晶Ⅰ与结晶Ⅱ对脾淋巴细胞免疫毒性较小;3.动物体内实验显示，结晶Ⅰ能抑制S180和H22小鼠体内肿瘤的增长，也能明显提高S180和H22腹水瘤小鼠的生命延长率;4.瑞氏和吉姆萨混染法、吖啶橙染色法均显示结晶Ⅰ与结晶Ⅱ可诱导细胞凋亡;FCM法检测也显示结晶Ⅰ可诱导细胞凋亡并伴随G2/M期细胞的增加，结晶Ⅱ也可诱导细胞凋亡并伴随G0/G1期细胞的增加。 结论:结晶Ⅰ与结晶Ⅱ在体外对不同组织来源的肿瘤细胞增殖有明显的抑制作用;体内试验表明结晶Ⅰ能抑制荷瘤小鼠的瘤体生长，明显延长荷瘤小鼠的生存期;结晶Ⅰ的体外抗肿瘤作用机制可能是通过阻滞肿瘤细胞于G2/M期和促进细胞的凋亡;结晶Ⅱ的体外抗肿瘤作用机制可能是通过阻滞肿瘤细胞于G0/G1期和促进细胞的凋亡。
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