摘要
1.利用传统的分离方法从内蒙古产野生仙鹤草植株中分离获得17株内生真菌，从江西产仙鹤草中分离得到20株内生真菌，采用形态学鉴定，其主要归属于曲霉属、木霉属、毛霉属、镰孢霉属、酵母属。内蒙古及江西产仙鹤草内生菌株均以曲霉属为主，将其与本课题组前期从浙江产仙鹤草中分得的30株内生真菌进行比较，发现浙江产仙鹤草内生真菌以镰孢霉属主。浙江产仙鹤草生物多样性最显著。 2.本文对内蒙古产及江西产仙鹤草内生真菌菌株进行了活性筛选，结果显示，其中6株内生真菌菌株发酵产物具有较强的抗氧化活性，25株内生真菌菌株发酵产物能抑制胃癌细胞SGC的增殖，10株内生真菌菌株发酵产物对结肠癌细胞LOVO的增殖有一定的抑制作用。将内生菌株接种至含仙鹤草多酚粗提物的培养基中，测定其对仙鹤草粗提物中多酚类物质的转化作用。结果表明，21株内生真菌菌株能提高培养基中多酚类物质的含量，其中菌株R3-1提高幅度最大。采用分子生物学技术，鉴定R3-1菌株为黄曲霉（Aspergillusflavus）。 3.选取14株能提高多酚类物质含量的内生真菌菌株，采用人工接种的方法与仙鹤草组培苗进行共培养实验，筛选出1株能与组培苗共生且对组培苗的生长有促进作用的内生菌株(R2-2)。对该菌株进行分子生物学鉴定，确定为棘孢木霉Trichoderma spp.。将菌株R2-2接种至组培苗，在不同生长阶段测定组培苗次级代谢产物的含量。培养7周后，该菌株能使宿主多酚含量提高13.4％，黄酮类的含量提高1.9倍，其中芦丁含量提高67.7％，木犀草素含量提高71.3％。而其对宿主多糖类物质积累具有一定的抑制作用，对皂苷类物质积累影响不显著。 4.选取4株能降低多酚类物质的内生菌株R2-2，R3，R3-2，S8，分别对宿主黄酮类成分芦丁、木犀草素、槲皮素进行体外生物转化，对转化后的产物采用HPLC测定，培养四周后，4株菌株对三种黄酮类物质均有一定的转化作用。其中菌株S8对芦丁与槲皮素的转化率最高，分别为4.95％、16.4％。菌株R3对木犀草素的转化率最高为27.4％，菌株R2-2的生物转化作用不明显。
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