摘要
背景及目的:胃腺癌是我国常见的恶性肿瘤,然而对其治疗一直未令人满意,这和胃腺癌细胞对诱导凋亡的相对耐受有着密切关系。目前除了传统的外源性和线粒体细胞凋亡途径之外,内质网在细胞凋亡中发挥的作用也越来越受到关注。由于血供不足,营养条件差以及药物影响等因素,肿瘤细胞内存在内质网应激的发生。应激本身是细胞自我保护的行为,但是如果应激时间过长或强度过大,应激信号可以激活多种凋亡靶基因,引发细胞凋亡。研究表明,Bcl-2家族蛋白成员参与调节内质网应激诱导的细胞凋亡。Mcl-1是Bcl-2家族中一个重要的抗凋亡家族成员,参与线粒体细胞凋亡途径,同时在内质网应激中也发挥至关重要的作用。Mcl-1基因的表达可以在多个水平受到调控,已知重要的转录因子E2F-1可以转录调控Mcl-1的表达。本实验就以胃腺癌细胞为研究对象,用衣霉素诱导细胞,构建内质网应激的模型,旨在研究Bcl-2家族蛋白成员,特别是Mcl-1在内质网应激介导的胃腺癌细胞凋亡中的作用以及调控Mcl-1的机理,以期为临床药物干预提供新的靶点。 方法:采用不同浓度的衣霉素(TM)在不同时间点处理体外培养的SGC-7901、BGC-823胃腺癌细胞和HEK-293人胚肾上皮细胞。通过PI染色法流式细胞术检测细胞凋亡率。通过Western blot检测caspase-9,-3的活化以及GRP78、Mcl-1、Bcl-2、E2F-1的蛋白变化。通过JC-1染色法流式细胞术检测线粒体膜电位(Δψm)的变化。通过qRT-PCR法检测Mcl-1 mRNA水平的变化。转染pcDNA-Flag-E2F-1质粒,Western blot检测E2F-1的表达情况和转染前后Mcl-1蛋白水平的变化,流式细胞术检测凋亡率的变化。 结果:衣霉素诱导胃腺癌细胞凋亡具有时间和剂量相关性,相对照HEK-293细胞,两株胃腺癌细胞对衣霉素诱导的凋亡都不敏感,其中SGC-7901较BGC-823细胞对衣霉素诱导的凋亡表现更加耐受,这可能与Mcl-1在蛋白水平和mRNA水平的上调有关。同时,衣霉素处理并不诱导Bcl-2在胃腺癌细胞中的表达变化。转录因子E2F-1在衣霉素诱导后是下调的。在内质网应激状态下的胃腺癌细胞中高表达E2F-1可以减弱Mcl-1的上调,细胞凋亡率明显上升。并且随着转染质粒浓度的增加,Mcl-1表达下降更加明显。 结论:胃腺癌细胞对内质网应激诱导的凋亡相对耐受,与Mcl-1在蛋白表达水平和mRNA转录水平上调有关,表明Mcl-1在胃腺癌细胞对内质网应激性凋亡的耐受中起到一定的作用,而转录因子E2F-1参与了对Mcl-1表达的调控。
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