摘要
课题目的:本课题研究对象为糖尿病大鼠模型,以中医理论为指导,结合现代医学的研究和实验技术,通过对糖尿病大鼠视网膜超微结构的观察、眶静脉血清中一氧化氮(NO)和蛋白质非酶糖基化产物(AGEs)含量的检测,探讨补肾明目丸对实验性糖尿病大鼠视网膜病变的影响及作用机理,从而为补肾明目丸的临床应用提供理论依据。 方法:四氧嘧啶(ALX)诱导的糖尿病大鼠模型法。诱发的糖尿病大鼠随机分为3组:模型组(MG)、补肾明目丸组(SG)、导升明组(DG),并设正常组(NG)进行对照。正常组、模型组、补肾明目丸组、导升明组分别以生理盐水、生理盐水、补肾明目丸溶液、羟苯磺酸钙溶液灌服,每日1次,共计灌胃6个月。 实验期间每半月监测1次血糖、尿糖和体重。造模后第1月、3月、6月在糖尿病大鼠各组随机挑选2只处死,采集标本。通过形态学、免疫组化等方法进行以下指标检测观察:1.电子显微镜下观察糖尿病大鼠视网膜超微结构的改变。2.血清中AGEs和NO含量的变化。 实验结果:1.正常组大鼠体重迅速增加,模型组增加缓慢,补肾明目丸组、导升明组药物治疗后体重较用药前增加,其中补肾明目丸组体重增加较为显著。 2.正常组大鼠生存状态良好,模型组为“三多一少”现象明显,补肾明目丸组、导升明组大鼠的“三多一少”现象相较模型组有所减轻。 3.模型组、补肾明目丸组、导升明组眼眶静脉血清AGEs均显著高于正常组(P<0.05),其中AGEs值始终最高者为模型组,补肾明目丸组AGEs值低于导升明组(P<0.05),各组间差异有统计学意义(P<0.05)。 4.模型组、补肾明目丸组、导升明组的眼眶静脉血清NO均值明显低于正常对照组(P<0.05),其中NO值始终最低者为模型组,补肾明目丸组的NO值最接近正常组。 5.模型组、补肾明目丸组、导升明组血糖、尿糖始终高于正常对照组(P<0.05),其中血糖、尿糖最高者为模型组,补肾明目丸组血糖、尿糖最低。 6.电镜下可见: 正常组:可观察到视网膜毛细血管由内皮细胞,周细胞和基底膜构成。内皮细胞结构清晰,排列整齐且平行,外核层由视细胞胞体和胞核组成,细胞核形状规则,核仁明显,染色质分布均匀。内节椭圆体内有丰富的线粒体、粗面内质网、核糖体等细胞器整齐排列,结构正常,分布密集。神经原纤维、神经胶原细丝丰富,排列均匀规则。模型组:造模后1月、3月、6月随病程的延长,视网膜神经细胞大量凋亡,外核层细胞核固缩,胞体皱缩扭曲,胞质极少,视细胞外节膜盘与周围间隙日趋加大,结构模糊不清。内节椭圆体内线粒体水肿,排列不规则。神经原纤维、神经胶质细丝数量减少、结构紊乱的趋势逐渐加重。 补肾明目丸组:大鼠视网膜超微结构的病变程度较模型组大大减轻,未发现凋亡的视神经细胞,仅有轻微内皮细胞和周细胞肿胀、染色质边集现象。核周间隙增宽幅度小,胞质接近正常,胞质内线粒体、内质网等细胞器数量有所减少,部分形状不规则,神经原纤维、神经胶原细丝形状较规则,排列尚整齐,数量未见明显减少。 导升明组:大鼠视网膜毛细血管改变与补肾明目丸组类似,内皮细胞出现增生,膜盘间隙增宽但较模型组小,周细胞数量减少,细胞核形状出现不规则,部分核仁消失,染色质出现边集现象,内质网普遍弥漫性扩张。 课题结论:利用补肾明目丸干预治疗后的糖尿病模型大鼠,其视网膜超微结构的病变程度与模型组相比,有明显改善。并且能减缓糖尿病模型大鼠血清中AGEs的积累,抑制NO的氧化损伤,同时还具有全身性的监督调节功能,对糖尿病大鼠的视网膜和视神经起到保护作用。从而减轻糖尿病大鼠视网膜病变的程度,减缓病情发展,达到预防和治疗早期糖尿病视网膜病变的目的。
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