摘要
目的:本课题是国家中医药行业科研专项“19种中药生熟异用饮片临床规范研究”的子课题“地黄生熟异用饮片临床规范研究”的一部分。围绕地黄不同炮制品化学成分变化和降糖、抗炎、滋阴清热药理作用进行对比研究。其目的是对中药地黄生熟异用进行系统研究,说明生熟饮片的作用特点与临床适应症的关系,揭示地黄饮片的化学成分、药理作用变化等差异及其科学内涵。研究使用的地黄药材来源为玄参科植物地黄Rehmanniaglutinosa Libosch.的块根。主要通过比较地黄不同炮制品梓醇含量变化,建立地黄饮片高效液相指纹图谱,对不同炮制品的变化进行对比研究;建立糖尿病、炎症、阴虚发热动物模型,对比研究地黄不同炮制品在降糖、抗炎、滋阴清热方面药理作用的差异;为临床合理、恰当使用地黄不同炮制品饮片提供建议和参考,保证临床用药安全有效。 方法:采用高效液相法,确定地黄中梓醇的测定方法,测定鲜地黄、生地黄及熟地黄中梓醇的含量;采用HPLC法建立生地黄的高效液相指纹图谱,比较鲜地黄、生地黄及熟地黄指纹图谱出峰位置、数量及峰面积上的区别;采用高糖高脂饲料饲养4周,腹腔注射(ip)链脲佐菌素(STZ)40mg·kg-1的方法建立大鼠糖尿病模型,灌胃(ig)给药3周后测定各组大鼠体重、摄食量、饮水量及血糖、肝糖原、INS、GK、PK、PFK-1、G-6-Pase、CHO、TG、HDL-c指标的差异;采用足趾腱膜下注射10%蛋清生理盐水溶液0.03mL的方法建立小鼠炎症模型,测定各组小鼠足肿胀度、抑制率及T-SOD、NO、PGE2、5-HT、HIS、MDA指标的差异;采用ig甲状腺片生理盐水混悬液12.5mg·kg-14周,皮下注射(sc)20%干酵母生理盐水混悬液10mL·kg-1的方法建立大鼠阴虚发热模型,ig给药2周后测定各组大鼠体重、摄食量、饮水量及cAMP、cGMP、T3、T4、全血粘度、血浆粘度指标的差异。 结果:地黄饮片中梓醇的最佳提取工艺条件为50%乙醇超声提取30min,地黄不同炮制品中梓醇的含量比较结果为:鲜地黄3.46%>生地黄0.81%>熟地黄0.33%;确定生地黄高效液相指纹图谱条件(色谱柱:Waters Symmmetry Shield TMRP18(4.6×250mm,5μm);流动相:乙腈(A)-0.1%磷酸水(B),梯度洗脱(0min,99%B;10min,99%B;120min,73%B);流速1.0mL/min;检测波长217nm;柱温30℃;进样量10μL),利用Chromap Chromafinger 2005 beta 0.1色谱软件对其指纹图谱相似度进行分析,得出十批生地黄饮片指纹图谱相似度不低于0.8,比较同批鲜地黄、生地黄及熟地黄饮片指纹图谱,发现不同炮制品指纹图谱在出峰位置、数量和峰面积上都有区别;地黄不同炮制品水煎组和醇提组均能不同程度地改善糖尿病大鼠多饮、多食和体重下降的症状,其中生地黄水煎组的作用尤为突出,鲜地黄汁组、生地黄水煎组和生地黄醇提组均能不同程度地降低糖尿病大鼠的空腹血糖和餐后血糖,其作用机制可能有三:一是与促进胰岛素释放并增强机体对胰岛素的敏感性有关;二是与促进肝糖原合成有关;三是与增强糖酵解过程关键酶GK、PFK-1、PK活性同时降低G-6-Pase活性,从而加快葡萄糖分解有关,熟地黄水煎组、熟地黄醇提组对降低糖尿病大鼠空腹血糖和餐后血糖的作用不明显;鲜地黄汁、生地黄水煎和生地黄醇提均能显著性减轻小鼠足肿胀度,减少PGE2、HIS、5-HT等炎性介质的合成与释放,降低炎症组织中MDA含量,提高血清中SOD活性,并且能够降低NO的含量以减少炎症过程中自由基的产生,而熟地黄水煎组和熟地黄醇提组作用不明显;地黄不同炮制品均能改善阴虚模型大鼠的症状,可能通过调节甲亢阴虚模型大鼠血清中T3、T4的含量和血浆中cAMP、cAMP/cGMP而达到滋阴作用,其中鲜地黄的作用最明显,生地黄次之,鲜地黄组、生地黄组与模型对照组相比,极显著性降低阴虚发热大鼠全血粘度及血浆粘度,说明二者对发热引起的血液粘度增高有明显改善作用,清热效果明显,而熟地黄在此方面的作用不甚明显。 结论:地黄中的梓醇在加工炮制过程中逐步减少;同批鲜地黄、生地黄及熟地黄饮片指纹图谱差别明显,可作为地黄不同炮制品的鉴别方法;鲜地黄、生地黄和熟地黄均有不同程度的降糖作用,而鲜地黄、生地黄的降糖作用比熟地黄的显著,因此建议在临床降糖方中应用鲜地黄和生地黄,不用或少用熟地黄;鲜地黄和生地黄具有良好的抗炎作用,而熟地黄抗炎作用不明显,生熟地黄功效不同;地黄不同炮制品均有滋阴作用,以鲜地黄为优,生地黄次之,另外,鲜地黄和生地黄有明显的清热作用,而熟地黄没有,因此建议临床滋阴清热多用鲜地黄和生地黄,不用或少用熟地黄。
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