摘要
目的:本实验以藏药鲁堆多吉（藏党参）为研究对象，观测藏党参提取物含药血清和党参炔苷对三种前列腺癌细胞株(LNCaP细胞，DU145细胞，PC3细胞)生长和凋亡的影响，并应用细胞生物学技术研究藏党参提取物含药血清和党参炔苷对前列腺癌细胞生长和凋亡影响的作用机制。应用LCMS-IT-TOF技术探究藏党参血清中的成分。为藏党参和党参炔苷的应用提供科学数据。 方法:将藏党参提取物含药血清和党参炔苷分别作用于与LNCaP细胞、DU145细胞、PC3细胞，使藏党参提取物含药血清和党参炔苷的终浓度分别达到5％、10％、15％、20％和6.25μg、12.5μg/mL、25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL，共培养12h、24h、48h、72h、96h后用细胞增殖试剂盒检测细胞生长活性并计算藏党参提取物含药血清和党参炔苷对前列腺癌细胞的生长抑制率。 用TUNEL法检测不同浓度的藏党参提取物含药血清和党参炔苷对LNCaP细胞、DU145细胞、PC3细胞的凋亡诱导效应并计算诱导指数。用酶联免疫法试剂盒检测不同浓度的藏党参提取物含药血清和党参炔苷对LNCaP细胞前列腺特异性抗原(PSA)分泌的影响。 用酶联免疫法(ELISA)检测藏党参提取物含药血清和党参炔苷分别对LNCaP细胞雄激素受体(AR)表达的影响，对LNCaP细胞、DU145细胞和PC3细胞Gli1、BCL-2和TGFβ1表达的影响。 用LCMS-IT-TOF技术研究藏党参含药血清和空白血清间的差异，探索可能的药效物质，并提取分子离子峰推测差异物质的结构。 结果:藏党参和潞党参含药血清与LNCaP细胞、DU145细胞、PC3细胞共培养12h后，即可显著抑制上述三种前列腺癌细胞的生长(P＜0.05);共培养48h后LNCaP细胞和PC3的抑制率达到最大，共培养72h后DU145细胞的抑制率达到最大。 党参炔苷与LNCaP细胞共培养24小时以后能显著抑制LNCaP细胞的增殖。党参炔苷与DU145细胞共培养72小时以后能显著抑制DU145细胞的增殖。党参炔苷与PC3细胞共培养12小时以后能显著抑制PC3细胞的增殖。 藏党参含药血清和潞党参含药血清能剂量依赖性地显著诱导LNCaP细胞、DU145细胞、PC3细胞的凋亡，使凋亡指数显著升高(P＜0.01)。藏党参含药血清、潞党参含药血清和党参炔苷能剂量依赖性地显著抑制PSA的分泌(P＜0.05)。 藏党参含药血清、潞党参含药血清和党参炔苷能显著抑制LNCaP细胞、DU145细胞、PC3细胞中Gli和TGFβ1的表达水平(P＜0.05)。藏党参含药血清和潞党参含药血清能显著抑制LNCaP细胞中雄激素受体(AR)的表达(P＜0.05)。藏党参含药血清给药组、潞党参含药血清给药组和党参炔苷的中高剂量组能显著抑制LNCaP细胞中BCL-2的表达(P＜0.05)。藏党参含药血清和潞党参含药血清的中高剂量组能显著抑制PC3细胞中BCL-2的表达水平(P＜0.05)。 将藏党参含药血清的总离子流色谱峰与空白血清的总离子流色谱峰对比分析得到10个差异的分子离子峰。将潞党参含药血清的总离子流色谱峰与空白血清的总离子流色谱峰对比分析得到5个差异的分子离子峰。通过对比藏党参和潞党参含药血清TIC，结合质谱图推断，发现藏党参和潞党参含药血清含有2个共同的化学成分，其分子离子峰分别为m/z407[M-1]-和m/z391[M-1]-。应用多离子色谱分析法，对原药材中可能存在的5种化合物进行分子离子峰的识别追踪，推断藏党参和潞党参含药血清中都含有党参炔苷、大黄素和京尼平苷。 结论: 1.藏党参含药血清和潞党参含药血清中的有效成分可抑制LNCaP细胞、DU145细胞和PC3细胞的生长并诱导它们的凋亡。 2.藏党参含药血清、潞党参含药血清和党参炔苷能显著抑制LNCaP细胞PSA的分泌。 3.藏党参含药血清和潞党参含药血清可能通过抑制LNCaP细胞Hedgehog通路中的Gli1蛋白表达从而抑制AR和BCL-2的表达，进而抑制PSA的分泌和促进LNCaP细胞的凋亡。 4.藏党参含药血清和潞党参含药血清可能通过抑制PC3细胞中BCL-2的表达促进PC3细胞的凋亡。 5.党参炔苷可能通过抑制TGFβ1的表达从而抑制LNCaP细胞、DU145细胞和PC3细胞的增殖。 6.党参炔苷可能通过抑制LNCaP细胞Hedgehog通路中的Gli1蛋白表达进而抑制BCL-2的表达促进LNCaP细胞的凋亡。 7.对比分析含药血清负离子模式下的TIC，发现有10个差异峰。应用多离子色谱分析法推断藏党参含药血清中可能含有党参炔苷、大黄素和京尼平苷。 8.藏党参含药血清、潞党参含药血清和党参炔苷通过不同的作用机制抑制前列腺癌细胞的增殖。这提示，藏党参、潞党参和党参炔苷具有应用于前列腺癌治疗的前景。
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