摘要
目的: 正天丸由鸡血藤、钩藤、川芎等十五味中药组成的中药复方，其在临床应用上治疗偏头痛，防止其复发，具有巨大的优势和市场前景。其中鸡血藤是方剂中用量最大的中药材，主要原料药质量稳定是方剂质量保证的基础，然而，由于鸡血藤的来源复杂，常出现混用现象，对鸡血藤类植物的鉴别中，《中国药典》中鸡血藤只有简单的薄层鉴定，难以有效控制鸡血藤的质量;另外正天丸质量标准中也缺少了与鸡血藤相关成分的含量研究。因此，为了更好的控制正天丸的质量，本研究依据正天丸组方药材的性质和特点，建立其主要原料药鸡血藤多指标的综合评价体系对其质量进行客观、合理的评价，并运用气相色谱，高效液相色谱等技术，对鸡血藤饮片以及正天丸质量标准进行较系统的研究，为建立安全、稳定、可控的质量标准打下基础。 方法: 1.1鸡血藤质量标准研究 参照《中国药典》2010年版，对鸡血藤中药饮片进行水分、灰分常规检查，另外，参照“药用植物及制剂外经贸绿色行业标准”规定，对南领GAP基地收集的鸡血藤进行了重金属残留、微生物限度和农药残留量的测定;采用薄层色谱法对鸡血藤的芒柄花素进行定性鉴别;采用近红外光谱技术对不同产地鸡血藤进行定性和真伪鉴别，采用UHPLC-DAD联用技术，测定儿茶素、表儿茶素和原儿茶酸的含量，并采用HPLC-DAD法测定芒柄花素的含量;最后，采用UHPLC-DAD联用技术建立正天丸特征图谱的研究方法，通过各阴性对照对各共有峰进行药味归属，以对照品定位，确认特征峰。 1.2正天丸质量标准研究 参照《中国药典》2010年版一部丸剂项下相关规定对正天丸进行了重量差异、装量差异和水分检查;建立了快速液相色谱法同时测定正天丸中原儿茶酸，阿魏酸，藁本内酯含量;并采用快速液相色谱对正天丸进行分析，对提取条件（包括提取溶剂、提取次数等）和色谱条件（包括流动相梯度、柱温等）进行优化和系统的方法学考察，建立正天丸的特征图谱;最后运用气质联用色谱技术分析正天丸挥发油的主要化学成分。 结果: 1.1鸡血藤饮片质量标准研究 本研究18批鸡血藤药材水分、灰分、浸出物检查项及薄层鉴定均符合药典要求，对鸡血藤的微生物限度、重金属残留测定和农药残留量检测均符合要求。建立了芒柄花素薄层鉴别方法，供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点，斑点清晰，分离度好;建立了鸡血藤近红外光谱模型，可对鸡血藤进行真伪鉴别，并区分不同来源的鸡血藤样品;建立了同时测定3种成分的快速液相方法，UHPLC-DAD测定的3种组分的线性关系均良好（r＞0.999），加样回收率为98.58％-101.00％(RSD≤1.41)，方法学考察良好，原儿茶酸含量在0.0281-0.1567mg/g，儿茶素含量在0.2898-0.7843mg/g，表儿茶素含量在0.4691-1.9966mg/g之间;建立了芒柄花素的含量方法，方法学考察结果良好，含量在0.0048-0.1887mg/g之间;建立了鸡血藤饮片HPLC特征图谱共有模式，标定了13个共有指纹峰，确认了4个已知共有峰作为特征峰，并规定了各特征峰与参照峰的相对保留时间值，样品的各特征峰的相对保留时间的RSD均≤0.1％。各批次样品平均相似度大于0.9。 1.2正天丸质量标准研究 本实验对13批正天丸进行了重量差异、水分的检查均符合药典要求;建立了正天丸中川芎薄层鉴别，在供试品色谱中，在与各对照药材色谱和各对照品色谱相应的位置上，均显相同颜色的斑点，薄层色谱斑点清晰，分离度好，阴性对照均无干扰;采用快速液相色谱建立正天丸原儿茶酸，阿魏酸及藁本内酯含量测定，UHPLC-DAD测定的3种组分的线性关系均良好（r＞0.999），加样回收率为100.68％-102.69％(RSD≤0.56％)，方法学考察良好，原儿茶酸含量在0.0061-0.0173mg/g，阿魏酸含量在0.0781-0.1159mg/g，藁本内酯含量在0.0796-0.3887mg/g之间;参照《中国药典》对正天丸芍药苷进行含量测定，结果13批样品含量均大于0.72mg/g，符合药典规定。特征图谱研究显示，不同批次正天丸间相似度差异不大，标定了9个共有指纹峰，确认了3个已知共有峰为特征峰，并规定了各特征峰与参照峰的相对保留时间值，各批次样品平均相似度大于0.8;挥发油使用气质联用技术分析鉴定出22种的化学成分，并用面积归一化法，测定出13批正天丸主要成分（油酸、藁本内酯等）、（3，5-二甲氧基苯、2-甲氧基-4-乙烯基苯酚、黄樟素和甲基丁香酚）的平均相对含量，为完善正天丸的质量标准提供参考依据。 结论: 1.2鸡血藤质量标准研究 本实验采用快速液相色谱法与传统的HPLC相比，具有省时、节能、高效的特点，方法简便、快速，适用于鸡血藤儿茶素类成分的含量测定，可以作为鸡血藤的质量控制标准;建立了鸡血藤中黄酮类成分芒柄花素含量测定的方法及鸡血藤特征图谱测定方法对其质量进行控制;使用NIR近红外光谱成功确定了鸡血藤的定性模型，为以后建立定量模型打下基础，为判别不同生产地区鸡血藤及其伪品的真伪鉴别提供依据。 1.2正天丸质量标准研究 本实验通过薄层色谱、快速液相色谱、气质联用色谱等技术进一步完善正天丸的质量控制标准，研究涉及了方中多为中药材的明确活性成分，如鸡血藤的原儿茶酸，细辛的细辛脂素、3，5-二甲氧基苯、2-甲氧基-4-乙烯基苯酚和甲基丁香酚，川芎和当归中的阿魏酸，藁本内酯等成分，并采用UHPLC-DAD特征图谱中对多种指标成分进行分析控制，为正天丸质量标准的研究提供参考。
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