摘要
研究背景及目的： 膀胱癌(bladder cancer)是老年人病死率最高的恶性肿瘤，同时也是泌尿生殖系统肿瘤中受环境及年龄影响最大的恶性肿瘤。随着全球工业污染的日益加剧及世界人口老龄化趋势的不断增长，欧美国家膀胱癌发病率在男性恶性肿瘤中已位居第四位，死亡率位居第八位。发生肿瘤转移后，5年生存率达到男性恶性肿瘤中最低的5％。近年来我国的膀胱癌发病率快速上升。据报道，上海地区膀胱癌发病率从1998年的8.6/10万上升到2006年的14.7/10万，是我国泌尿系统中最常见的恶性肿瘤之一。膀胱癌具有高复发的特征，非肌层浸润性膀胱癌复发率高达80％。此外，34％-64％的患者在发生膀胱癌复发的同时，肿瘤的侵袭性及转移性也在不断升高。 microRNA(miRNA)是一类长度约为19-25个核苷酸的非编码小片段RNA。成熟体miRNA进入核糖蛋白复合体中通过与mRNA的3'UTR相互作用，抑制mRNA转录后翻译或直接降解mRNA。micorRNA对于生物体的生长发育、衰老、免疫应答、肿瘤形成等各个生物学过程具有重要作用。在植物中，miRNA与靶基因mRNA高度匹配，主要通过降解靶mRNA的方式抑制其表达;而在哺乳动物中，miRNA主要通过与靶基因mRNA的不完全互补配对，进而抑制靶mRNA的翻译。 miRNA的功能非常重要，目前认为体内至少30％的基因表达受miRNA调控。半数以上的miRNA基因位于肿瘤相关基因区域或位于基因组的脆性位点。近几年大量研究表明microRNA在肿瘤的发生、发展中具有重要的作用;对于肿瘤的诊断、治疗及预后具有重要的临床指导意义。 本课题通过基因芯片发现肌层浸润性膀胱癌表达miR-15b明显高于非肌层浸润性膀胱癌。提示miR-15b可能促进膀胱癌疾病的进展。为了探讨miR-15b在膀胱癌的疾病进展过程中的作用及机制，展开此课题研究。 研究方法： 1、microRNA芯片实验。 2、通过实时定量PCR实验扩大样本量验证差异性表达的microRNA-15b。 3、通过过表达和抑制细胞中miRNA-15b，观察细胞的增殖、迁移和侵袭能力的改变。 4、通过流式细胞术检测过表达miRNA-15b后细胞凋亡情况的变化。 5、通过western blot验证miRNA-15b的靶基因。 结果： 1、microRNA基因芯片发现肌层浸润性膀胱癌组织中microRNA15b较非肌层浸润性膀胱癌普遍高表达。 2、扩大样本量发现microRNA15b在癌组织中的表达高于癌旁组织，在肌层浸润性膀胱癌的表达高于非肌层浸润性膀胱癌的表达。 3、CCK-8检测法表明miR-15b促进体外细胞增殖而miR-15b inhibitor抑制细胞增殖。细胞划痕实验表明miR-15b促进体外细胞迁移。Transwell实验表明miR-15b促进细胞侵袭而miR-15b inhibitor抑制细胞侵袭。 4、miR-15b能抑制膀胱癌细胞凋亡。 5、通过信息学分析bcl-2为miR-15b的靶基因之一。western blot验证了过表达miR-15b能抑制bcl-2的表达。 结论： miRNA-15b在膀胱癌和肌层浸润性膀胱癌中高表达，它能够在体外促进膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭，抑制膀胱癌细胞凋亡。它通过靶向作用于bcl-2促进膀胱癌疾病进展，有望成为膀胱癌诊断、鉴别肌层浸润性膀胱癌和非肌层浸润性膀胱癌的标志以及治疗的靶点。
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