摘要
目的：研究金雀异黄素(Genistein，Gen)对类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis，RA)患者间充质干细胞(Mesenchymal stem cells，MSCs)中的核因子κB受体活化因子(receptor activatorof nuclear factor kappa B，RANK)、核因子κB受体活化因子配体(Receptor activator ofnuclear factor kappa B ligand，RANKL)和骨保护素(osteoprotegerin，OPG)系统的影响及其机制。 方法：为了获得相对均一的原代培养的人骨髓MSCs(BM-MSCs)，本实验采用密度梯度离心法结合贴壁筛选法从正常人与RA患者的骨髓中分离、纯化培养出BM-MSCs，倒置显微镜下观察细胞形态，流式细胞术鉴定细胞表型。将正常人与RA患者的BM-MSCs分为空白对照组、Gen处理组、雌二醇(estradiol，E2)处理组和Gen+雌激素受体拮抗剂(ICI182780)组，采用Western blot法检测BM-MSCs中RANK、RANKL、OPG的表达;采用免疫荧光法检测雌激素受体α(estrogen receptorα，ERα)细胞内分布情况。 结果：分离培养的BM-MSCs呈长梭形，排列规则，符合BM-MSCs的形态特征;流式细胞术鉴定结果显示CD29、CD90阳性率超过95％，CD34、CD4阳性率低于2％，符合BM-MSCs基本特征标志。Western blot结果显示与正常人BM-MSCs相比，RA患者BM-MSCs中的RANK的蛋白表达水平明显升高，OPG的蛋白表达水平明显降低，数据分析显示RANKL/OPG比值升高;Gen显著上调RA患者BM-MSCs中OPG表达，对RANK、RANKL表达无明显影响，从而降低RANKL/OPG比值，与E2作用类似;Gen+雌激素受体拮抗剂组与Gen组和E2组相比OPG蛋白表达水平降低，但仍高于Con组水平。免疫荧光结果显示Gen能促进BM-MSCs中ERα入核。 结论：Gen可以通过活化雌激素受体介导的相关信号通路，调控RA患者BM-MSCs中RANKL/OPG的表达，从而调节破骨细胞和成骨细胞的分化，起到抑制RA关节破坏和促进受损关节修复的作用。
NETL