摘要
本论文以中草药炮制学发酵法为基础，结合现代生物发酵技术，利用牛源益生菌N-14对黄芪(Radix Astragali)进行发酵处理，以提高黄芪溶出率，增强黄芪药效，主要研究内容和结果如下: 从实验室保存的益生菌中筛选出一株高产纤维素酶和木质素酶的菌株N-14，经菌落形态、生理生化试验和16s rDNA鉴定菌株N-14为甲基营养型芽孢杆菌(Bacillusmethylotrophicus)。该菌株羧甲基纤维素酶活力、木质素过氧化物酶、锰过氧化物酶、漆酶活力分别为:27.06U/mL、13.85U/mL、10.47U/mL和14.50U/mL。 采用琼脂板扩散法及比浊法从14种中草药中筛选出对EHEC有抑制作用，同时对N-14有增殖作用的黄芪，做为发酵中草药。通过发酵液急性毒性试验、最大耐受试验以及病理组织切片，确定黄芪经N-14发酵后，属于无毒制剂，安全性很高。 采用有机溶剂萃取方法，以黄芪水提液为对照组，比较发酵过程中总糖类、总皂苷类、总黄酮类物质含量的变化。研究表明，经过18h发酵，发酵液中总黄酮和总皂苷含量均相应减少，而黄芪总多糖的含量相对增加，最高可达40.604 mg/mL，较对照组提高了66.78％，推测N-14具有生物转化能力。 以粗多糖提取率为响应指标，在单因素试验基础上，采用响应面分析法，确定最优发酵条件为底物浓度4g、发酵时间24h、灭菌时间和温度为121℃、15min、接种量1％、pH为7、无机盐6g。在此优化条件下，黄芪多糖得率比优化前提高了57.31％。 以肉兔为试验动物，环磷酰胺作为免疫抑制剂进行造模，探讨黄芪发酵液药理学作用。从试验结果看，与环磷酰胺组相比，饲喂黄芪发酵液中剂量试验组作用最为明显，肠道内消化酶活力分别较免疫低下组提高159.85％、14.74％、160.86％;脾脏指数提高了43.59％，胸腺指数提高了53.41％(P＜0.05)，圆小囊指数提高了58.04％(P＜0.01)，吞噬细胞吞噬率提高了58.87％(P＜0.01);吞噬细胞吞噬指数提高144.26％(P＜0.01)，SOD活性提高了17.47％(P＜0.01)，MDA含量降低了65.38％(P＜0.01)，T-AOC能力提高了50.56％(P＜0.01)。表明用N-14黄芪发酵液在对抗环磷酰胺对免疫器官的损伤，非特异性免疫和抗氧化能力等方面都有明显增加，证明N-14发酵黄芪能取得较好效果。
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