摘要
苦荞是一种二倍体一年生作物，广泛种植于亚洲、欧洲。苦荞可在高海拔地区种植，生长期短，种子蛋白含量高，在我国部分山区及北半球一些国家是重要的粮食作物。苦荞的氨基酸含量均衡，含有芦丁、槲皮素、山奈醇-3-芸香糖苷等黄酮类药用成分。苦荞大多种植于贫瘠的土地上，产量不高，通过分子标记辅助育种方法提高其抗逆性，改良品质及产量是苦荞产业化发展的重要课题。 遗传图谱的构建是分子标记辅助育种的基础，同时也是植物基因组研究的重要内容之一。对于具有重要经济价值的苦荞来说，构建遗传图谱可用于优良基因和重要农艺性状定位、分子标记辅助育种，意义重大。 本研究以滇宁一号（母本）与野苦荞（父本）的136株F2代为作图群体，利用两种分子标记，对适用于苦荞的SRAP和SSR反应体系的建立以及标记的分离分析等方面进行了研究，并构建出目前第一张苦荞分子遗传连锁图谱。具体研究内容如下: 采用交互正交设计L27(313)对苦荞SRAP-PCR、SSR-PCR反应体系进行了5因素（Mg2+、dNTP、Taq酶、模板DNA和引物）3水平优化实验，并进行了验证，最佳SRAP-PCR反应体系为:总体积20μl，Mg2+1.5mmol/L，dNTP0.2mmol/L，Taq酶1.5U，模板DNA40ng，引物0.25μmol/L，10×buffer2μl;最佳SSR-PCR反应体系为:总体积20μl，Mg2+1mmol/L，dNTP0.3mmol/L，Taq酶1.5U，模板DNA30ng，引物0.25μmol/L,10×buffer2μl。 将扩增产物进行非变性与变性PAGE和两种电泳操作系统检测，结果表明，非变性PAGE、DYCZ-24F操作系统更适合于SRAP的分析。 利用165对SRAP引物扩增亲本及杂交F1代DNA，筛选到多态性引物43对，多态性比例为26.1％。用43对多态性引物对F2群体进行分析，共获得多态性标记50个，其中引物M1E2、M3E3、M6E19、M10E4、M11E17分别产生两条多态性标记;引物M1E6产生3条多态性标记。经卡方测验，获得的50个多态性标记中，有35个(70％)SRAP标记符合孟德尔分离比例。从148对SSR引物中筛选到多态性引物26对，多态性比例为17.6％。用26对多态性引物对F2群体进行分析，只有一对引物标记无偏分离现象，其它25对全部偏于母本。 利用Mapmaker/EXP3.0软件构建了包含10个连锁群，由37个SRAP标记、1个SSR标记组成的遗传连锁图谱。该图谱总长725.1cM，标记间最大图距为46.6cM，最小图距为2.2cM，平均图距为25.9cM;连锁群上的标记数在2-6个之间，LG4、LG6包含的标记最多，均为6个;LG3、LG8、LG9包含的标记数最少，为两个。 本论文构建的苦荞遗传连锁图谱，优点是标记在图谱上清晰、特异扩增、重复性好;缺点是标记少、密度低，需要进一步利用SRAP标记进行加密，建立较完整的苦荞分子遗传连锁图谱。
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