摘要
目的:探索地黄有效活性成分梓醇抗糖尿病肾病（diabetic nephropathy, DN）的作用及其机制。 方法:在整体动物和细胞水平，探索梓醇对DN的保护作用及其可能机制。实验共分为两个部分:①采用高脂饲料喂养联合小剂量腹腔注射链尿佐菌素(streptozotocin，STZ)的方法建立DN动物模型，将150只雄性SD大鼠随机分为普通饲料饮食组(n=20)和高脂饲料饮食组(n=130)，各组动物予以相应饲料喂养持续4周。4周后，高脂饲料饮食组SD大鼠腹腔注射1％ STZ溶液35mg/kg，制备糖尿病(diabetic mellitus，DM)动物模型，普通饲料饮食组动物腹腔注射等容量的柠檬酸缓冲液。注射STZ溶液72h和2周后，分别测量实验动物的随机血糖值(random blood glucose，RBG)，两次RBG均≥16.7mmol/L视为稳定的DM模型。将55只DM大鼠随机分为5组，每组11只:DM组，DM+二甲双胍组（200mg/kg），DM+梓醇低剂量组（30mg/kg），DM+梓醇中剂量组(60mg/kg)和DM+梓醇高剂量组（120mg/kg）。正常血糖大鼠随机分为2组，每组10只:正常对照组，正常+梓醇对照组(60mg/kg)。各给药组i.g相应药物，正常组和DM组i.g蒸馏水，每日一次，连续10周后，测定大鼠血糖，血清胰岛素，肾脏质量指数，肾功能指标，肾皮质转化生长因子-β1（transforming growth factor, TGF-β1）、结缔组织生长因子（connective tissue growth factor, CTGF）、血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ，AngⅡ)、超氧化物岐化酶(superoxide dismutase，SOD)、丙二醛(malondialdehyde，MDA)、纤维连接蛋白（fibronectin，FN）和Ⅳ型胶原浓度(collagen typeⅣ，ColⅣ)。病理形态学检测:肾皮质病理切片，PAS染色观察肾小球细胞外基质(extracellularmatrix，ECM)的表达量。RT-PCR法测定肾皮质TGF-β1和CTGF mRNA的表达量。②高糖培养环境下，观察不同浓度梓醇（6.25umol/L、12.5umol/L、25umol/L、50umol/L）对肾小球系膜细胞增殖性，细胞内活性氧(reactive oxygen species，ROS)浓度，FN，ColⅣ和层粘连蛋白(LN)分泌量的影响。Western blot法分别检测梓醇对高糖刺激下TGF-β1的表达量，及对TGF-β1诱导下smad2/3磷酸化程度的干预作用。 结果:①梓醇能降低DM大鼠血糖值及肾脏质量指数，改善肾功能;提高肾组织抗氧化应激能力;减少肾皮质AngⅡ、TGF-β1、CTGF浓度，抑制ECM成分FN和ColⅣ合成与积聚。下调TGF-β1及CTGF mRNA表达。②梓醇能抑制高糖刺激下肾小球系膜细胞的过度增殖，降低细胞内ROS浓度，减少LN，FN和ColⅣ分泌量;下调TGF-β1蛋白表达量，并干预smad2/3磷酸化进程。 结论:梓醇具有良好的抗实验性糖尿病肾病作用，能够显著改善肾功能，抑制细胞外基质成分过度合成。其作用机制独立于其降血糖作用，可能与降低DN形成过程中过度上调的RAAS活性，缓解氧化应激，抑制TGF-β1/smad信号转导通路的激活有关。
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