摘要
目的：按照《保健食品检验与评价技术规范》（2003版）和保健食品申报要求，探索样品提取分离与制备的技术参数;对高良姜提取物小鼠体内缓解体力疲劳功能进行前期研究。研究辣椒素受体提取物组分与“抗氧化、缓解体力疲劳”生物活性的相关性，进行黄酮类、二苯基庚烷类和挥发油类的活性比较，为高良姜“抗氧化、缓解体力疲劳”保健食品组方提供科学依据。 方法：⑴以高良姜道地药材为研究对象，制备乙醇提取物浓缩浸膏。采用计算机辅助色谱行为模拟优化色谱分离体系，以减压-硅胶层析法(VLC)对提取物进行分离和放大实验，以TLC结合HPLC-MS检测分离效果，优化制备层析工艺条件和方法，分离制备高良姜各组分。⑵体外“抗氧化”活性评价采用H2O2诱导HepG2细胞氧化应激损伤模型，以MTT法检测细胞活性、流式细胞术检测细胞凋亡的方法测定高良姜各分离组分细胞内抗氧化性损伤的活性。⑶体内“缓解体力疲劳”活性评价，参照《药理实验方法学》（徐叔云著，第三版）相关章节的实验方法和卫生部《保健食品检验与评价技术规范》(2003年版)“有助于缓解体力疲劳”功能检验方法项下“负重游泳实验”方法，测定高良姜各提取物对小鼠负重游泳时间的影响。⑷参照文献报道的高良姜化合物鉴定数据，在本课题组建立了高良姜提取物HPLC指纹图谱、并对主要色谱峰进行了归属与鉴别的研究基础上，本实验采用HPLC-MS结合TLC及感官检验，对高良姜提取物组分进行分离与鉴别，建立各活性组分HPLC色谱图，并将其与活性进行关联分析，为高良姜“抗氧化、缓解体力疲劳”保健食品组方提供科学依据。 结果：①通过计算机辅助色谱行为模拟优化得到溶剂体系(乙酸乙酯∶石油醚Ⅱ=36∶64)+2％乙酸，以该溶剂体系在100mm色谱柱上对高良姜提取物进行VLC分离制备。TLC结合HPLC-MS法鉴别显示，高良姜主要组分得到了良好的分离。②MTT体外“抗氧化”活性实验显示，各分离组分相对于模型组，均可提高细胞存活率，其中组分A、B更为显著，组分A可使细胞存活率达到71.9％(P＜0.05)。③FCM体外“抗氧化”活性实验显示，相比于模型组，组分B、组分D可降低细胞凋亡率，组分B(细胞凋亡率46.3％±11.3％)＞D(55.4％±11.7％)。④以小鼠负重游泳实验结果评价各提取物组分体内“缓解体力疲劳”活性，结果显示，相比于对照组（14.90±6.52 min），提取物Ⅰ低剂量组(23.44±12.38min)、提取物Ⅱ低剂量组(19.85±10.41 min)均可延长小鼠负重游泳的时间，提取物Ⅰ作用更为明显(P=0.063)。⑤建立了高良姜药材及其各组分的HPLC色谱图，采用HPLC-MS结合TLC和感官检验对主要色谱峰进行了归属与鉴别。⑥依HPLC色谱图及其色谱峰鉴别与归属，对各提取物组分与活性做相关分析，比较高良姜主要部位的活性。 结论：⑴通过计算机辅助模拟TLC色谱行为，能够简捷高效地优选出VLC分离高良姜提取物色谱体系，实现高良姜提取物大量、高效的分离制备。⑵建立了高良姜药材及其各组分的HPLC色谱图，采用HPLC-MS结合TLC和感官检验对主要色谱峰进行了归属与鉴别，高良姜主要部位得到了良好的分离。⑶提取物组分与活性的相关性分析表明，高良姜“抗氧化、缓解体力疲劳”药效组分主要为二苯基庚烷类化合物，高良姜素等黄酮类也表现出一定的活性。⑷在相同浓度下，二苯基庚烷类有效部位的“抗氧化、缓解体力疲劳”活性优于黄酮类。
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