摘要
黑点病是套袋苹果果实上的一种重要病害，每年可导致3％-30％的产量损失。为了明确黑点病的致病菌、发病规律和流行条件，本研究从套袋果实黑点病斑上分离获得大量真菌株，测试了分离菌株的致病性，并进行形态和分子生物学鉴定;研究了温度和相对湿度对致病菌侵染与致病的影响，在套袋果实上进行了接种验证;系统监测了4个果园内黑点病的发病动态及与黑点病发病相关的果实性状，以期为黑点病的早期防控提供依据。 2011和2012年10月，自栖霞、蓬莱、沂源等地的23个果园中，共采集典型的黑点病果133个，从不同类型黑点病斑上组织分离得到9属真菌。参考已有报道，在离体的富士苹果成熟果实上，测试了分离频率较高且与黑点病症状密切相关的四属真菌（Trichotheciumsp.、Alternariaspp.、Acremoniumsp.和Fusariumspp.）菌株的致病性。其中Fusariumsp.菌株的致病力最强，自伤口接种后形成的病斑斑最大，病斑表面为规则圆形，浅褐色，接种点外围有白色霉层;Trichotheciumsp.菌株的致病力次之，自伤口接种后形成褐色不规则圆形病斑，病斑表面形成粉色霉层;Alternariaspp.菌株的致病力较弱，自伤口接种形成黑色病斑，中央有黑色霉层;Acremoniumsp.菌株致病力最弱，自伤口接种后形成红褐色、圆形病斑，病斑小、干枯凹陷，偶有粉色霉层。四属真菌的菌株均不能使成熟无伤果实发病。经形态和分子生物学鉴定，所测试菌株分别为T.roseum、A.tenuissima、Fusariumsp.和A.sclerotigenum。 Acremonium属真菌6个各菌株之间的形态差异较大，但各菌株的ITS、β-tubulin、SSU和LSU序列，均完全一致，依据最新的Acremonium属分类系统，将所测试的6菌株均鉴定为A.sclerotigenum。A.sclerotigenum是一种机会真菌，条件适宜时能大量侵染成熟果实，导致褐色病斑。 控温、控湿条件下人工接种试验表明，Z.roseum的分生孢子在10℃～35℃下都能侵染受伤的果实，并使果实发病，26.8℃下侵染量最大，病斑在22.5℃下生长扩展最快;A.tenuissima的分生孢子10℃～35℃下都能侵染用受伤的果实，并诱发黑色病斑，孢子侵染的最适温度为29.4℃，病斑扩展的最适温度为28.5℃;A.sclerotigenum从伤口侵染率高，适应温度范围广，在20℃～35℃下，温度变化对病菌分生孢子的侵染和病斑扩展影响很小。 田间的接种试验结果表明，T.roseum、A.tenuissima和A.sclerotigenum的分生孢子在田间套袋果实上主要导致圆形、黑色的“黑点型”病斑;其中，用T.roseum分生孢子接种的套袋果实，发病率最高，病斑数量最多;用A.tenuissima孢子接种果实次之;用A.sclerotigenum孢子接种的果实几乎没有发病。从5月至9月的5次接种申，6月17日接种的果实发病最重，果实发病率和病斑数量显著高于其他时间接种的果实，暗示这一时期果实对黑点病的较为敏感。 2013年四个果园的系统监测结果表明，7月15日在监测果实上首次发现病果，8月14日病果率达14.8％，每果病斑数为3.2个，此后没有增加。病斑均为黑点型，组织分离主要得到粉红单端孢和链格孢属真菌，两属真菌的频率分别为32.7％和38.1％。四个果园中，套袋果各时期单果重和纵横径比未套袋果大，套袋果发育前期细胞分裂比未套袋果旺盛。套袋果B和Ca元素含量比未套袋果低，N含量高，对于相关果实性状与营养元素含量对黑点病发病的影响有待继续研究。
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