摘要
背景与目的：乙肝相关性肝癌(HBV相关性HCC)的显著特点为男性发病率高。雄激素受体（AR）信号通路在乙肝相关性肝癌中发挥重要作用，但是具体分子机制还不清楚。华蟾素在临床上对HBV相关性HCC有良好的治疗作用，但其作用机制还有待研究。此课题的研究目的为阐明AR分子信号通路在HBV相关性HCC发生中的机制，探究HBV相关性HCC男性发病率高的原因;研究AR分子信号通路在HBV相关性HCC发生中的功能及干预此信号通路后对HCC的治疗作用;基于AR信号通路揭示华蟾素抗HBV相关性HCC的作用机制。 方法：在人永生细胞株及肝癌细胞株中用染色质免疫共沉淀，启动子变异及荧光素酶报告试验检测转录调控。用RT-PCR和Western blot分别检测细胞中mRNA及蛋白的表达水平。用集落形成试验及软胶集落形成试验分别检测肝肿瘤细胞的增殖及恶性转化。在二乙基亚硝胺(DEN)干预的HBx转基因小鼠肝癌模型中，用慢病毒包装针对CCRK的shRNA予小鼠尾静脉注射导入肝脏，观察对肝肿瘤形成的影响。在异位移植瘤裸鼠模型中，用华蟾素干预，观察对肿瘤生长的影响。用Ki67免疫组化检测肿瘤组织中细胞增殖情况。用GraphPad Prism5统计软件对数据进行统计学分析，两组间的基因表达，启动子活性，集落形成，细胞增殖，肿瘤多发性，体积，重量比较用Student's t test，多组间基因表达比较用one-wayANOVA和Bonferroni修正。人正常肝组织，HCC肿瘤组织及癌旁组织蛋白相对表达量的比较用非参数Wilcoxon's配对检验或者Mann-Whitney U检验。病人的临床病理资料比较中，计数数据用Fisher's精确检验，计量数据用Mann-WhitneyU检验。病人生存率比较用Kaplan-Meier生存分析，用log-rank Mantel-Cox检验比较差异。P＜0.05为有显著性差异。 结果： 1.HBx能通过AR信号通路诱导CCRK表达，而CCRK能通过AR信号通路反向诱导HBx的表达，在HBx-CCRK反馈环路中，HBx和CCRK共同通过GSK-3β/β-catenin/TCF信号通路对AR激活起着重要作用。 2.CCRK敲除能有效减少HBx诱导的正常细胞恶性转化及HBx转基因小鼠肿瘤形成（小鼠HCC数量，对照组vs敲除组，平均数=3.44，95％ CI=1.68-5.21vs平均数=0.67，95％ CI=0.12-1.21，P＜.01）;在HBx转基因小鼠及HBV相关性HCC病人中，环路成分表达存在性别差异性;AR调控环路的高激活与病人低生存率及高复发率显著相关(高激活组vs低激活组，风险比率(HR)=31.26,95％ CI=8.10-120.60,P＜.0001; HR=6.30,95％ CI=1.69-23.54，P＜.01)。 3.华蟾素具有良好的抗HCC细胞增殖，恶性转化以及抑制肿瘤生长的作用。在机制上，其不仅能通过抑制HBx影响AR信号环路，在没有HBx的情况下，也能直接抑制AR信号通路的表达。 结论： 1.新的HBx-AR-CCRK调节环路在HBV相关性HCC的发生发展中起着重要作用，与HBV相关性HCC男性发病率高有密切关系。 2.对此病毒-宿主反馈环路的干预对HCC的防治是有意义的。 3.华蟾素能通过调节AR调控环路发挥抗HCC的作用。
NETL