摘要
背景: 炎症性肠病( Inflammatory bowel disease,IBD)是一类原因不明的肠道慢性炎症性疾病。大多数研究认为IBD发病机制可能与遗传易感患者在肠腔内抗原诱导下免疫反应过度激活引起的。在炎症情况下,ATP释放增加,与免疫细胞膜P2X7受体结合,促使NLRP3炎性体重新组装,激活caspase-1,促进多种炎症因子的成熟与释放,从而诱导炎症性疾病的发病,如呼吸性疾病、神经性疾病、风湿性疾病及肾脏性疾病。然而,P2X7受体在炎症性肠病发病的作用尚待研究。 目的: 探讨P2X7受体在葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠结肠炎发病中的作用及机制。 方法: 将BALB/C小鼠随机分成4组:正常对照组,DSS+Suramin(P2X7受体抑制剂)组,DSS组,DSS+BzATP(P2X7受体激动剂)组。复制急性DSS结肠炎模型,小鼠自由饮用4%DSS7天后改饮用蒸馏水2天后处死;饮用DSS第4天开始,DSS+BzATP组、DSS+Suramin组分别每天给予BzATP1mg、Suramin1mg腹腔注射至第8天。每天观察各组小鼠体重变化、腹泻及有无血便等情况来评估疾病活动指数(DAI),造模结束后取结肠组织行HE染色评估结肠炎严重程度。检测各组炎症肠段中MPO含量,免疫组织化学法检测结肠中CD68及caspase-1 p10在粘膜固有层细胞中的表达,ELISA法检测TNF及IL-1β含量。结果: 1. DAI评分:第10天正常对照组小鼠的 DAI评分均为0。DSS组为8.25±2.25, DSS+BzATP组为9.4±0.55,这两组比 DSS+Suramin组明显升高(p<0.05)。 2.组织学评分:DSS+Suramin组小鼠的组织学评分为3.63±0.74,与DSS组(8.25±1.58)、DSS+BzATP组(9.2±2.17)相比明显降低(p<0.05),但明显高于正常对照组(p<0.05)。 3.结肠匀浆MPO活性:DSS+Suramin组小鼠的MPO活性为0.33±0.06 U/g,与DSS组(0.49±0.07U/g)、DSS+BzATP组(0.54±0.10U/g)相比均有明显差异(p<0.05),但与正常组(0.23±0.03 U/g)相比无统计学意义(p>0.05)。 4.组织匀浆TNF含量:DSS+Suramin组为163.68±24.51 pg/ml,明显低于DSS组(281.35±30.33 pg/ml)、DSS+BzATP组(305.48±65.16 pg/ml)(p<0.05),但较正常组(126.18±23.24 pg/ml)增高(p<0.05)。 5.组织匀浆IL-1β含量:DSS+Suramin组为85.88±12.17 pg/ml,明显低于DSS组(146.21±27.99 pg/ml)、DSS+BzATP组(197.60±41.80 pg/ml)(p<0.05),但较正常对照组无明显增高(67.38±9.36 pg/ml)(p>0.05)。 6.结肠组织CD68的表达:DSS+Suramin组结肠组织CD68阳性细胞数明显低于DSS组及DSS+BzATP组(p<0.05),但较正常对照组增高(p<0.05)。 7.结肠组织caspase-1 p10的表达:DSS+Suramin组结肠组织caspase-1 p10阳性细胞数明显低于DSS组及DSS+BzATP组(p<0.05),但较正常对照组增高(p<0.05)。 结论: P2X7受体在DSS诱导的小鼠结肠炎发病中发挥促炎作用,机制可能为促进caspase-1活化,诱导免疫细胞释放炎症因子,促进肠道炎症反应。
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