NETL
菜蛾盘绒茧蜂病毒Ankyrin和PTP家族基因克隆、序列分析和一个Ankyrin基因启动子序列初步鉴定
陈征1
作者信息
摘要
在菜蛾盘绒茧蜂成功寄生小菜蛾的过程中，菜蛾盘绒茧蜂多分DNA病毒(CvBV)是起关键作用的主要寄生因子。在CvBV编码众多蛋白的基因家族中，蛋白酪氨酸磷酸酶(protein tyrosine phosphatases，PTPs)家族基因（PTP）和锚蛋白家族基因(Ankyrin)是成员数量最多的两个基因家族，并且寄生后基因的表达也非常快。Ankyrin被认为是主要的免疫抑制相关基因，在寄生蜂寄生寄主中参与了抑制寄主免疫反应中的信号传导，尤其是对寄主Toll信号途径的关键步骤中的NF-kB直接进行抑制。PTP由于其参与细胞内磷酸化水平的调控，能在信号途径的多个步骤中与寄主的PTP进行竞争性抑制。所以研究其基因结构，尤其是启动子，对于揭示PDV抑制寄主免疫的机理机制则显得尤为重要。 本文克隆了6个PTP基因和1个Ankyrin基因，并对其序列功能进行了初步研究;同时利用重构建含有萤火虫荧光素酶基因的载体转染HEK293细胞的方法，得到1条具有启动活性的启动子序列。现将结果总结如下: 1)采用cDNA末端快速扩增技术(RACE)获得了7条cDNA的全长序列，所克隆的7条cDNA的全长序列命名为CvBV-C2-2、CvBV-C12-2、CvB V-C12-5、CvB V-C12-11、CvBV-C14-5、CvB V-C4-6和CvBV-C28-1，长度分别为966bp、1130bp、1301bp、1245bp、1383bp、1177bp和1057bp，开放阅读框长度分别为492bp、900bp、894bp、948 bp、972bp、1005 bp和831bp，分别编码163、299、297、315、323、334和276个氨基酸，预测分子量分别为18867.54、34607.06、34514.32、36583.69、36583.69、39166.89和32001.44Daltons。序列翻译蛋白序列分析结果表明，CvBV-C2-2基因翻译Ankyrin蛋白，其它6个基因序列均翻译PTP蛋白。 2)利用重构建的含有萤火虫荧光素酶报告基因载体转染HEK293细胞的方法，得到Ankyrin基因家族的1条具有启动活性的启动子序列。结果显示，在验证的多个基因中，发现了一个基因的上游启动子序列启动报告基因，检测到了荧光值，为C17-4基因，且该基因C17-4P2和pGL3-Enhancer Vector重构建的载体样品与C17-4P3和pGL3-EnhancerVector重构建的载体样品中都有荧光值，且后者相对荧光强度明显弱于前者，而C17-4P1和pGL3-Enhancer Vector重构建的载体样品中则没有检测到数值。
关键词
小菜蛾/菜蛾盘绒茧蜂病毒/蛋白酪氨酸磷酸酶/锚蛋白/免疫抑制/基因克隆/Ankyrin基因/PTP家族基因引用本文复制引用
授予学位
硕士学科专业
农业昆虫与害虫防治导师
陈学新/时敏学位年度
2014学位授予单位
浙江大学语种
中文中图分类号
S4