摘要
目的: 观察上调肺癌A549细胞miR-200c表达对紫杉醇、吉非替尼药物敏感性及两药联合作用的影响,并从分子水平探讨其发生的可能作用机制。 方法: 1.细胞转染及转染效率的检测:运用脂质体2000瞬时转染肺癌A549细胞,分别转染miR-200c mimic(转染组)、mimic NC(阴性对照组),只加入培养基为空白对照组,采用实时定量PCR检测各组miR-200c及靶基因ZEB1表达量,比较各组间表达差异。 2.实验分组及药物处理:转染组及阴性对照组分别加入紫杉醇(miR-200c-T组和 Control-T组)、吉非替尼(miR-200c-G组和 Control-G组)、两药联合(miR-200c-G+T组和 Control-G+T组),并设立不加药物组(miR-200c组和Control组)。 3. MTT法观察转染后紫杉醇、吉非替尼及两药联合对肺癌A549细胞敏感性的影响。 4. Western Blot检测转染后给予药物处理各组细胞TUBB3蛋白、EGFR、Akt、MAPK磷酸化蛋白及总蛋白表达变化。 结果: 1.细胞转染后,实时定量PCR检测miR-200c及ZEB1表达结果显示:转染组与阴性对照组和空白对照组相比,miR-200c表达明显升高,P<0.01;ZEB1表达明显降低,P<0.01。 2. MTT观察不同药物处理后对A549细胞敏感性的影响:miR-200c-T组与Control-T组和miR-200c组相比,miR-200c-G组与Control-G组和miR-200c组相比较,细胞增殖抑制率增加,P<0.05。miR-200c-G+T组与Control-G+T组相比, miR-200c-G+T组与miR-200c-T组、miR-200c-G组比较,细胞增殖抑制率无明显差异,P>0.05。 3. Western Blot结果显示加入紫杉醇后,miR-200c-T组与 Control-T组和miR-200c组比较,TUBB3蛋白表达显著降低,P<0.01。加入吉非替尼后, miR-200c-G组与Control-G组和miR-200c组相比,EGFR、Akt磷酸化蛋白表达降低,P<0.05;MAPK磷酸化蛋白及总蛋白、EGFR、Akt总蛋白表达无明显差异,P>0.05。加入紫杉醇联合吉非替尼后,miR-200c-G+T组与Control-G+T组比较,EGFR、Akt、MAPK磷酸化蛋白及总蛋白表达无明显差异,P>0.05。miR-200c-G+T组与miR-200c-G组比较,EGFR、Akt磷酸化蛋白表达无明显差异,P>0.05;miR-200c-G+T组与miR-200c-T组比较,EGFR、Akt磷酸化蛋白表达降低,P<0.05。 结论: 1. miR-200c可通过抑制TUBB3蛋白表达增强紫杉醇对肺癌A549细胞的敏感性。 2. miR-200c可能通过抑制EGFR和Akt磷酸化蛋白表达提高吉非替尼对肺癌A549细胞敏感性。 3.肺癌A549细胞miR-200c表达上调后对紫杉醇联合吉非替尼无协同抗肿瘤作用。
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