摘要
目的:建立一种适用于口咽部微生物群落结构研究的DNA富集方案，描述肝硬化患者及并发肺炎患者口咽部优势菌群结构特征。 方法:采集健康对照组、肝硬化组及肝硬化并发肺炎组的咽拭子，提取咽拭子的DNA，经全基因组扩增技术(WGA)富集后再使用细菌16S rRNA基因V3区通用引物进行PCR变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)获得优势菌群的指纹图谱。对优势条带进行割胶回收测序，对DGGE指纹图谱进行多样性分析，主成分分析，对优势条带进行灰度分析及检出率分析。 结果:(1)经WGA富集后结合PCR-DGGE，我们成功地获得了清晰的口咽部DGGE指纹图谱。(2)肝硬化并发肺炎组口咽部优势菌群的多样性最高，其次是肝硬化组，健康对照组最低。主成分分析结果显示肝硬化并发肺炎组、肝硬化组和健康对照组各组各自聚集，区分良好，肝硬化并发肺炎组感染相同病原菌的个体聚在一起。(3)肝硬化组与健康对照组相比，发现有7个菌群发生变化，弯曲杆菌属(32.4)菌群水平降低，嗜血杆菌属(34.5)、链球菌属/乳杆菌属(45.5)、月形单胞菌属(61.3)和Olsenella(90.9)菌群水平增高，Bulleidia(26.5)和链球菌属(33.0)菌群检出率增高。 结论:优化的WGA富集方案结合PCR-DGGE技术可以直观地展示口咽部优势菌群的分子生态结构。肝硬化患者口咽部粘膜优势菌群结构显著不同于健康人。初步筛选出的7个微生物的变化可能是肝硬化患者并发肺部感染的诱因，但确定这些标志性微生物仍需要后期的大样本量的验证。
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