摘要
目的：探讨人肾皮质近曲小管上皮细胞表面补体片段C3a受体(C3aR）的激活对于单核趋化蛋白-1(CCL2)与受激活调节正常T细胞表达和分泌因子(CCL5)表达产生的影响。 方法：体外培养人肾皮质近曲小管上皮细胞(HK-2)，以0、75、150、300、600umol/L浓度尿酸(UA）分别作用6、12、24及48小时，利用RT-PCR检测CCL2、CCL5、C3和C3aR的mRNA水平，选择最适的尿酸诱导浓度和诱导时间。在UA或脂多糖(LPS)诱导下，通过小干扰RNA(siRNA)转染下调HK-2细胞C3的表达、小分子C3aR阻断剂阻断C3a-C3aR作用、外源性C3a刺激促进C3aR激活三种方式抑制或激活C3aR的信号通路，并通过Q-PCR及ELISA法检测其对于CCL2、CCL5表达产生的影响。 结果：150umol/L UA干预HK-2细胞12h可同时上调C3与CCL2的mRNA转录水平；在该实验中，UA对于HK-2细胞CCL5 mRNA的诱导作用较弱，使用RT-PCR法在各浓度及时间点下未检测出明显统计学差异，此后改用LPS对CCL5进行诱导。C3siRNA转染或C3aR阻断能够抑制被UA或LPS上调的CCL2及CCL5的表达。C3a单独干预HK-2细胞时显著上调了CCL5的表达，但对CCL2的表达几乎无诱导作用。而当C3a与UA或LPS进行联合干预时，其显著增强了UA或LPS对CCL2的诱导作用及UA对CCL5的诱导作用。 结论：HK-2细胞表面C3aR的激活为CCL2、CCL5的表达提供了重要的刺激信号，阻断C3a-C3aR相互作用能够显著抑制UA或LPS诱导的HK-2细胞CCL2及CCL5的表达。
NETL