摘要
目的:通过观察香烟烟雾提取物(cigarette smoke extract, CSE)联合UVB照射对人皮肤成纤维细胞端粒长度和端粒酶活性的影响，进一步探讨在吸烟过程中产生的烟雾及紫外线照射在促使皮肤发生老化的作用。 方法:采用细胞旧液与细胞新液按1∶2比例的方法培养人皮肤成纤维细胞并绘制生长曲线;MTT法检测CSE对人皮肤成纤维细胞增殖的影响;用三种不同浓度的CSE和UVB照射（30mJ/cm2）处理人皮肤成纤维细胞后采用实时定量聚合酶链反应技术(RT-PCR)检测端粒长度的变化，同时采用聚合酶链反应-酶联免疫吸附试验(PCR-ELISA)方法检测端粒酶活性的变化情况。 结果:采用细胞旧液与细胞新液按1∶2比例的方法培养人皮肤成纤维细胞与常规培养方法相比较，其倍增时间相对较短，其潜伏期为0-1d，生长期为2-4d，第4d之后细胞增殖缓慢，进入一个比较稳定的平台期;常规培养细胞的方法:潜伏期为0-2d，生长增殖期为2-5d，第5d之后则进入稳定的平台期;CSE对人皮肤成纤维细胞的增殖在低浓度（＜37.5μL/mL)时具有促进作用，在高浓度(＞75μL/mL)时具有抑制作用，但与未加CSE组相比较，差异均无统计学意义(p＞0.05); UVB照射组和CSE联合UVB照射处理组人皮肤成纤维细胞的端粒长度与端粒酶活性的变化情况与未处理组差异具有统计学意义(p＜0.05)，且随着CSE浓度的增加，端粒长度与端粒酶活性的变化情况越明显。 结论:采用按细胞旧液与细胞新液比例为1∶2的方法培养人皮肤成纤维细胞其倍增时间相对较短，可在较短时间内获得增殖能力较强且生长稳定的细胞用于后续实验;通过MTT法检测得知，加入CSE处理组细胞增殖率与未加CSE组相比较，差异无统计学意义(p＞0.05);CSE和UVB照射可在缩短人皮肤成纤维细胞端粒长度的同时降低端粒酶的活性，且呈现浓度-效应关系。故我们推断CSE和UVB照射可通过影响端粒-端粒酶的变化来促进皮肤老化的发生。
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