摘要
目的:骨肉瘤是一种临床常见的好发于青少年的成骨性恶性肿瘤，它恶性程度高，预后比较差。随着化学疗法、手术技术、骨重建等方法的进展，5年总生存率明显提高。阿霉素(adriamycin，ADM)、顺铂(diamminedichloroplantinum，DDP)是抗骨肉瘤的最有效药物，但肿瘤细胞对化疗药物产生耐药性是影响化疗疗效的主要原因。许多化疗药物通过诱导凋亡抗肿瘤生长。XIAP是凋亡调节因子家族中对凋亡调节作用最强的分子之一，同时是唯一的caspases抑制剂。研究显示它在多种恶性肿瘤中上调表达，并与肿瘤化疗耐药及预后差紧密相关。RNAi是近年来发展起来的新技术，siRNA已经成为继反义核酸、核酶之后基因治疗的又一新武器。为此，我们合成特异性干扰XIAP基因的siRNA，并在脂质体介导下转染骨肉瘤MG-63细胞，观察其对骨肉瘤细胞生长抑制以及细胞侵袭性的影响，以及对骨肉瘤MG-63细胞ADM药物敏感性及耐药性的影响，从而为新的骨肉瘤的治疗方法提供实验依据。 方法: 1根据XIAP基因已知序列化学合成1条含21-23个碱基的siRNA(XIAP-siRNA)及阴性对照(siRNA-neg);用化学合成的XIAP-siRNA转染骨肉瘤MG-63细胞，通过RT-PCR方法和流式细胞术检测转染前后MG-63细胞XIAP-mRNA和蛋白水平的表达情况，进一步观察转染前后骨肉瘤MG-63细胞增殖抑制的改变，流式细胞术和MTT法进一步检测转染前后MG-63细胞的凋亡及ADM对转染前后骨肉瘤MG-63细胞的半数抑制浓度(IC50)，观察化学合成的特异性XIAP-siRNA对骨肉瘤细胞增殖抑制的影响以及对骨肉瘤MG-63细胞ADM药物敏感性的影响。 2统计学方法 采用SPSS13.0进行分析处理，采用t检验和单因素方差分析，如多组间两两比较采用q检验，以P＜0.05认为差异有统计学意义。 结果: 1 XIAP-siRNA对骨肉瘤MG-63细胞增殖有抑制作用，使细胞周期阻滞发生在细胞周期的G0/1期，并能诱导凋亡。 2 XIAP-siRNA降低了XIAP mRNA和蛋白的表达水平。 3 XIAP-siRNA联合ADM作用的细胞抑制率达（63.1±2.1）％，流式细胞仪分析显示XIAP-siRNA组细胞的凋亡率明显高于转染非特异性siRNA组、空载组及未转染组。 结论: 1特异性的化学合成XIAP-siRNA能够下调骨肉瘤MG-63细胞XIAP基因和蛋白表达，阻滞细胞周期于G0/1期和诱导凋亡。 2特异性的化学合成XIAP-siRNA能增强骨肉瘤MG-63细胞对ADM的敏感性。RNAi技术有望成为肿瘤基因靶向治疗的一种新的途径。
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