摘要
目的：建立一种能模拟人类 RIRI特征的、可靠的动物模型，经兔耳缘静脉注射盐酸法舒地尔后，并分别通过 HE染色法观察视网膜形态学变化、TUNEL法检测神经细胞凋亡的变化及免疫组化法检测凋亡基因Bcl-2、Caspase-3蛋白表达的变化及盐酸法舒地尔对其的影响，从而进一步探讨盐酸法舒地尔对 RIRI的神经保护及作用机制，为RIRI的临床治疗提供理论依据。 材料与方法：1、实验动物分组：本研究选取54只健康雄性日本纯种大耳白兔作为研究对象，按照平行对照原则随机分为3组，其分别为：正常组（6只）、损伤组（24只）、治疗组（24只），其中损伤组和治疗组又按照不同的再灌注时间点（6 h、12h、24h、48h、72h、120h）分为6组。2、建立RIRI动物模型：损伤组和治疗组均采取前房灌注加压法造成视网膜缺血，并在缺血1h后，将眼内压迅速降至正常水平，从而制作成 RIRI动物模型。3、给药途径及方式：三组给药途径均为耳缘静脉注射，治疗组注射盐酸法舒地尔剂量为10mg/kg，正常组和损伤组则注射等剂量的平衡盐溶液。4、标本制作及方法：各组分别在再灌注后6h、12h、24h、48h、72h及120h处死动物并迅速摘除眼球，对不同时间段的视网膜组织分别通过 HE染色法观察视网膜形态学变化，并通过 TUNEL法检测神经细胞凋亡的变化和通过免疫组化法检测凋亡基因Bcl-2、Caspase-3蛋白表达的变化。 结果：1、视网膜形态学的变化：治疗组的视网膜损伤程度明显轻于损伤组。2、视网膜神经细胞凋亡的变化：在6h、12h、24h、48h、72h时间点，三组间同一时间点凋亡细胞计数结果两两比较均具有显著统计学意义（P＜0.01），而120h时各组间比较无明显统计学意义（P＞0.05）。损伤组：各个时间点上凋亡细胞计数比较有显著统计学意义（F值=13.06，P＜0.01）；治疗组：各个时间点上凋亡细胞计数比较有显著统计学意义（F值=22.54，P＜0.01）。3、凋亡基因Bcl-2蛋白的表达：在6h、12h、24h、48h、72h时间点，三组间同一时间点 Bcl-2蛋白表达两两比较均具有显著统计学意义（P＜0.01），而120h时各组间比较无明显统计学意义（P＞0.05）。损伤组：各个时间点 Bcl-2蛋白表达比较有显著统计学意义（F值=15.14，P＜0.01）；治疗组：各个时间点之间Bcl-2蛋白表达比较有显著统计学意义（F值=17.06，P＜0.01）。4、凋亡基因 Caspase-3蛋白的表达：在6h、12h、24h、48h、72h、120h时间点，三组间同一时间点 Caspase-3蛋白表达两两比较均具有显著统计学意义（P＜0.01）。损伤组：各个时间点之间阳性细胞计数差异有显著统计学意义(F值=65.860，P＜0.01）；治疗组：各个时间点之间阳性细胞计数差异有显著统计学意义（F值=276.550，P＜0.01）。 结论：1、盐酸法舒地尔能减轻视网膜缺血再灌注损伤，在维持视网膜的形态及功能中起着重要的作用；2、盐酸法舒地尔能抑制视网膜神经细胞的凋亡，其作用机制可能与提高 Bcl-2及降低 Caspase-3表达有关，从而在视网膜缺血再灌注损伤中对视网膜神经细胞起到明显的保护作用。
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