摘要
目的：黄芪甲苷（Astragaloside IV，AsIV）具有多种生物学活性，如抗氧化、清除自由基、抗炎等药理作用，本研究通过分子生物学手段探讨在应用氧化应激诱发的PC12细胞损伤中，黄芪甲苷发挥的保护作用及其具体机制。 方法：本研究用H2O2作用PC12细胞建立氧化应激损伤模型。采用MTT法观察AsIV对细胞活性的影响，同时确定 AsIV的最适保护浓度。通过线粒体肿胀实验测定 PC12细胞线粒体吸光度（OD）值的变化以判断 mPTP的开放程度，进而判断黄芪甲苷是否通过抑制 PC12细胞 mPTP的开放，产生细胞保护作用。通过Western blot法检测黄芪甲苷对磷酸化-GSK-3β（Ser9）、磷酸化-血管扩张刺激磷蛋白（Vasodilator stimulated phosphoprotion，p-VASP）（Ser239）的改变，探讨黄芪甲苷发挥PC12细胞保护作用的具体信号转导机制。 结果：1、MTT法对细胞活性检测结果显示，与空白对照组相比，H2O2（300μmol/L）组吸光度明显下降至（53.2±3.7%，P<0.05）。不同浓度的AsIV（100、200、400nmol/L）预处理组与 H2O2组相比，其吸光度下降程度减轻（70.4±5.1%，P<0.05；66.5±6.0%，P<0.05；61.9±3.8%，P<0.05），而以AsIV（100nmol/L）处理组这一作用最为显著（70.4±5.1%，P<0.05）。提示一定浓度的AsIV可以减轻氧化应激所引起的PC12细胞损伤，且100nmol/L AsIV的保护作用最强。2、线粒体肿胀实验结果显示，与空白对照组比较，H2O2（300μmol/L）组吸光度（OD）减少值明显增加（0.01380±0.00264，P<0.05）。与 H2O2组比较，100nmol/L AsIV预处理组能够减轻 H2O2导致的线粒体肿胀程度（0.01070±0.00250，P<0.05），提示 AsIV可通过抑制 mPTP的开放发挥保护作用。3、Western blot显示，与H2O2组相比，100nmol/L AsIV预处理后，p-GSK-3β表达增加（131.4±8.3%，P<0.05），并且这种增加作用可以被PKG抑制剂KT5823所阻断（60.5±6.6%，P<0.05），进一步的结果显示，与空白对照组相比，黄芪甲苷（100nmol/L）组能够使 VASP（Ser239）的磷酸化明显增加（116.0±7.1%，P<0.05），且此作用同样可被 KT5823所抑制（85.2±7.5%，P<0.05），提示 AsIV可能是通过cGMP-PKG信号通路调节GSK-3β（Ser9）的磷酸化，抑制mPTP的开放，阻止氧化应激损伤。 结论：1、黄芪甲苷能够减轻氧化应激诱发的PC12细胞损伤。2、黄芪甲苷通过抑制mPTP开放，阻止氧化应激损伤。3、黄芪甲苷通过使GSK-3β失活而抑制 mPTP的开放，从而发挥PC12细胞保护作用。4、黄芪甲苷抑制GSK-3β活性的作用可能与cGMP/PKG信号通路有关。
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