摘要
目的：比较人外周血与脐带血来源的内皮祖细胞经体外培养后生物学特性的差异。 方法：通过密度梯度离心法和6%羟乙基淀粉结合密度梯度离心法分别分离外周血与脐带血中的单个核细胞，并分别计数单个核细胞数量，按1.0×106/cm2接种于鼠尾胶包被的培养皿中，用内皮细胞培养基进行诱导培养7d。①计数收获内皮祖细胞的数量；②分别进行台盼蓝染液测定内皮祖细胞的活率；③绘制诱导后内皮祖细胞的生长曲线；④流式细胞仪检测内皮祖细胞免疫学特性CD133、CD34和VEGFR-2的表达量；⑤激光共聚焦检测内皮祖细胞标记物Dil标记乙酰化低密度脂蛋白和FITC标记荆豆凝集素I。 结果：外周血与脐带血体外培养分离出内皮祖细胞具有类似的形态学特征，显微镜下观察，随着培养天数的增加，大多数细胞由早期的贴壁圆形转变为梭形，培养第7天，外周血源组内皮祖细胞有细胞集落形成，脐带血源组可见梭形细胞自行排列生长为典型的线样结构。计数刚分离外周血源和脐带血源收获单个核细胞数，分别为（1.0±0.39）×106 L-1和（2±0.66）×106 L-1（P＜0.05）。以相同密度接种，培养诱导7天收获外周血源和脐带血源内皮祖细胞分别为（107.63±8.22）×104个和（423.5±34.91）×104个，（P＜0.05）。将培养7天的外周血或脐带血内皮祖细胞，行台盼蓝染色测定显示，外周血源和脐带血源内皮祖细胞活率分别为(97.6±0.86)%和(99.3±0.33)%，(P<0.05)。绘制诱导后内皮祖细胞的生长曲线显示,脐带血源内皮祖细胞的增殖能力明显高于外周血（P<0.05）,外周血源和脐带血源内皮祖细胞在接种后第三天增殖速度达到峰值,在随后的培养中细胞增殖呈衰减态。培养7天行流式细胞检测显示，外周血内皮祖细胞核脐带血内皮祖细胞均表达具有内皮祖细胞表型的CD133、CD34和VEGFR-2表面标志。免疫荧光检测显示外周血内皮祖细胞和脐带血内皮祖细胞既摄取Dil标记乙酰化低密度脂蛋白,也结合FITC标记荆豆凝集素I，为体外内皮祖细胞的标志。 结论：脐带血来源的内皮祖细胞与外周血来源的内皮祖细胞生物学特性相近，但增殖能力更高。
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