摘要
衰老及抗衰老一直是国内外研究的热点，衰老的自由基学说认为，衰老是机体细胞内化学反应过程中自由基堆积的结果。虽然自由基会对机体产生诸多危害，但是一般条件下，人体细胞内也存在着清除自由基、抑制自由基反应的体系，他们有的属于抗氧化酶类，有的属于抗氧化剂。随着年龄的增长，体内如SOD、CAT等抗氧化酶类的活性逐渐降低，清除自由基能力下降，自由基堆积加剧，进一步形成了衰老的恶性循环。因此，提高抗氧化酶类的活性，降低体内自由基的堆积和脂质过氧化物含量成为了抗衰老的有效途径。 金福菇是一种优质的食用菌，其多糖成分具有很高抗氧化性，前期研究发现，金福菇多糖TLH-3能有效的清除·DPPH及·O2-，其清除能力与VC相当。鉴于此，本课题从动物及细胞两个方面对金福菇多糖的抗衰老活性进行了研究。 本实验首先以D-半乳糖所致亚急性衰老小鼠为研究对象，研究了金福菇多糖(TLH、TLH-2、TLH-3)对衰老小鼠的保护作用，以VE为阳性对照，通过检测小鼠皮肤、血清、心脏、肝脏组织内SOD、CAT及MDA含量，来确定金福菇多糖是否具有抗衰老作用。从而为更深入的研究金福菇多糖的药理作用和研发新型的抗衰老药物提供理论指导和实验依据。 结果表明: 1.模型组小鼠皮肤羟脯氨酸含量明显增加，皮肤、心脏、肝脏、血清中SOD活性下降，MDA含量增加; 2.与模型组比较，TLH、TLH-2、TLH-3可显著降低小鼠皮肤羟脯氨酸含量，提高血清、皮肤、心脏及肝脏SOD、CAT活性，降低MDA含量; 3.金福菇多糖对D-半乳糖所致亚急性衰老小鼠的抗衰老作用大小为TLH-3＞TLH＞TLH-2。 由实验结果可知，金福菇多糖可能通过增加小鼠体内抗氧化酶活性，除去过量的氧自由基，并减少或阻止细胞和组织的破坏，从而保护细胞和组织的正常功能和延缓诱导D-半乳糖老化过程。 为了进一步证明TLH-3的抗衰老作用，本实验以t-BHP对人胚肺成纤维细胞(HELF)进行诱导建立细胞衰老模型，应用MTT法检测HELF细胞的存活率、Hoechst33342染色检测细胞的形态变化、流式细胞术检测HELF细胞的细胞周期及凋亡比率，同时通过检测内SOD活性及MDA含量，来确定TLH-3对HELF细胞氧化损伤的保护作用。 结果表明: 1.t-BHP对HELF细胞作用的LC50值大约为600μmol/l; 2.TLH-3(50-1000μg/ml)能显著提高衰老模型细胞的存活率，且存在剂量依赖关系; 3.Hoechst33342染色结果表明，模型组细胞皱缩，核分页，出现相应的衰老变化，而TLH-3在一定程度上可减轻这些衰老变化; 4.细胞周期检测结果表明，TLH-3可减缓t-BHP对HELF细胞造成的G1期阻滞; 5.细胞凋亡分析表明，ⅡLH-3可显著降低细胞的凋亡比率; 6.SA-β-半乳糖苷酶染色结果表明，TLH-3可显著降低HELF细胞内半乳糖苷酶活性。 7.TLH-3可显著提高HELF细胞内SOD活性(P＜0.05），降低MDA含量(P＜0.05)及细胞内ROS水平(P＜0.05); 由此可知，TLH-3可能通过提高细胞内相关的过氧化物酶系统对胞内过氧化物的清除能力而减轻HELF细胞内过氧化物的堆积，降低HELF细胞的G1期阻滞，延缓t-BHP对HELF细胞造成的氧化损伤。
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