摘要
灰霉病是由葡萄孢属真菌（Botrytis spp.）引起的一类重要病害，可以危害多种经济作物，包括番茄和草莓等。一旦发生，常造成重大经济损失。本研究从湖北省不同地区保护地种植的番茄与草莓采集灰霉病病样，从中分离Botrytis菌株。利用传统形态学观察、致病力测定和分子生物学分析等方法鉴定Botrytis种类，确定优势种群。通过分析各菌株转座子类型、Bc-hch基因的多态性以及对浓度为环酰菌胺(2μg/mL)的敏感性，探究优势种群灰葡萄孢（B.cinerea）的多样性规律。 本研究主要内容包括：⑴从番茄和草莓上共分离得到759个Botrytis菌株（393个菌株自番茄，366个菌株来自草莓）。其中，753个菌株产生黑色菌核，称为黑色菌系，5个菌株产生黄色菌核，称为黄色菌系，1个菌株菌核黑色素化推迟（黄色阶段长，最终变成黑色），称为黄黑菌系。⑵利用灰葡萄孢特异性PCR引物Bc-f/Bc-r对753个Botrytis菌株进行了分子鉴定。结果表明:751个菌株属于B.cinerea。可见，引起番茄与草莓灰霉病的优势病原是B.cinerea。⑶采用特异性PCR方法检测了753个Botrytis菌株中转座子有无及类型(Boty, Flipper、Boty+Flipper)。结果表明:390个来自番茄的菌株中，33个菌株属于Ⅰ型（只含Boty），59个菌株属于Ⅱ型（只含Flipper），17个菌株属于Ⅲ型(vacuma类型，同时缺少Boty和Flipper)，281个菌株属于Ⅳ型（Transposa类型，同时含Boty和Flipper）。363个来自草莓的菌株中，Ⅰ型有40个菌株，Ⅱ型有82个菌株，Ⅲ型有6个菌株，Ⅳ型有235个菌株。转座子类型以及频率与菌株来源（地域和寄主）无明显相关性。⑷测定了753个Botrytis菌株对环酰菌胺(2μga.i./mL)的敏感性。结果表明:其中的504个菌株为高度敏感型（256个菌株来自番茄，248个菌株来自草莓），138个菌株为中度敏感型（87个菌株来自番茄，51个菌株来自草莓），110个菌株为低度敏感型（46个菌株来自番茄，64个菌株来自草莓），1个菌株（来自番茄）为非敏感型。对这753个Botrytis菌株Bc-hch基因多态性。其中，752个菌株Bc-hch基因HhaⅠ酶切产生6条DNA片段(517 bp、287bp、155 bp、119bp、84 bp和9bp)，而1个菌株（HBtom-116）Bc-hch基因HhaⅠ酶切产生5条DNA片段(601 bp、287bp、155bp、119bp和9bp)。⑸明确了Botrytis菌株HBtom-116和HBs仃-336的分类属性。形态学观察、环酰菌胺敏感性检测、Bc-hch基因多态性分析、生物学特性测定、致病力测定、分子系统学分析等方法的研究结果表明:菌株HBtom-116属于假灰葡萄孢（Botrytispseudocinerea），菌株HBs仃-336属于卡罗来拉葡萄孢（Botrytis caroliniana）。
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