摘要
研究目的:黑色素瘤特异性抗原（PRAME）最初在黑色素瘤患者中发现，是一种能够被细胞毒性T淋巴细胞特异性识别并引起肿瘤溶解的表面抗原，是肿瘤睾丸抗原家族中的一员。目前已知PRAME在多种肿瘤细胞中均有表达，并且可见于少量正常组织，如睾丸、卵巢、肾上腺等。PRAME在多种肿瘤中的表达水平可作为肿瘤活跃程度及预后判断的指标之一。目前认为儿童青少年急性髓系白血病患者中，PRAME高表达多提示预后较好，但在原发性骨肉瘤，皮肤鳞状细胞癌等多种肿瘤中，PRAME多提示肿瘤预后较差且易发生转移。肺癌是临床最常见的恶性肿瘤之一，也是骨转移性肿瘤最常见的原发类型之一。为明确PRAME在肺腺癌及正常肺组织中的表达情况及其在肺腺癌发生发展中的作用，我们设计了本实验研究。 研究方法: 1.正常肺组织及肺腺癌组织中PRAME表达水平的检测获取正常人肺组织及肺腺癌患者肿瘤组织，通过免疫组化及qRT-PCR等检测明确PRAME的表达水平及两者间的差异。 2.PRAME表达水平对细胞增殖及凋亡的影响于肺腺癌细胞系PC9及A549中转染PRAME siRNA下调PRAME的表达，通过MTT试验及流式细胞技术检测PRAME表达抑制后肿瘤细胞增殖及凋亡变化情况，以及凋亡相关基因CASP8表达水平变化情况。 3.PRAME调节细胞增殖及凋亡的作用机制检测PRAME表达下调后BNIP3、DAPK1，p21，BCL10，CASP8，CASP10，BNAP3L及IGF1R等与肿瘤增殖凋亡相关基因的表达水平变化情况，以及同时下调PRAME及IGF1R后细胞增殖变化情况。 研究结果: 1.正常肺组织及肺腺癌组织中PRAME表达水平的检测免疫组化结果提示正常肺组织及肺腺癌组织中PRAME均有表达，其中正常肺组织中的表达水平更高。qRT-PCR同样证实正常肺组织中编码PRAME蛋白的mRNA水平明显高于肺腺癌组织。 2.PRAME表达水平对细胞增殖及凋亡的影响肺腺癌细胞系PC9及A549中，编码PRAME蛋白的mRNA水平在siRNA转染后明显低于对照组，PRAME蛋白表达亦明显降低，siRNA对PRAME的下调作用有效。MTT试验证实，siRNA转染后2-4天，两组细胞增殖较相应对照组均明显加快。流式细胞技术提示实验组较对照组细胞早期凋亡及晚期凋亡均明显减少，相应CASP-8蛋白表达亦降低。 3.PRAME调节细胞增殖及凋亡的作用机制 PRAME表达被抑制后，凋亡相关的BNIP3、DAPK1、p21、BCL10、CASP8、CASP10、BNAP3L等基因的表达水平均有所降低，而IGF1R的表达明显增高。将PRAME siRNA及IGF1R siRNA同时转染后，细胞增殖较PRAME siRNA单独转染时明显减慢。 结论:PRAME在正常肺组织及肺腺癌组织中均有表达，正常肺组织中PRAME的表达水平较高。下调PRAME表达水平可促进肿瘤细胞增殖并抑制其凋亡，IGF1R在这一过程中起重要作用。
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