摘要
目的: 研究抗糖尿病性白内障靶标蛋白醛糖还原酶(AR)与一氧化氮合酶(iNOS)之间的相互作用，以及探讨石斛活性成分石斛酚对二者相互作用的影响，从而深入阐明石斛抗糖性白内障的机理，为其开发利用奠定基础。 方法: 1.免疫共沉淀技术(CO-IP)检测AR与iNOS的相互作用，以iNOS抗体进行免疫共沉淀反应，用western blot检测AR蛋白，并初步比较石斛酚作用后对其相互作用的影响。 2.以EGFP-AR作为供体，Cy3-iNOS为受体，运用荧光共振能量转移受体光漂白技术进一步研究AR与iNOS的相互作用，得出石斛酚作用前后EGFP-AR与Cy3-iNOS间的能量转移率及距离。 结果: 1.免疫共沉淀技术(CO-IP)结果表明，选择iNOS的免疫共沉淀抗体进行免疫共沉淀反应，抗体、蛋白和葡萄糖磁珠结合，形成蛋白-抗体-proteinG agaros复合物，western blot可以检测到AR蛋白的表达。表明AR与iNOS存在相互作用，经过石斛酚作用后相互作用略增强。 2.Cy3和EGFP作为供受体对，使用FRET受体光漂白技术检测AR与iNOS的相互作用。AR与iNOS在人晶状体上皮细胞(HLEC)整个细胞中均有表达，并且二者具有共定位。选择细胞共定位的区域进行漂白，当受体Cy3-iNOS的荧光被漂白后，供体EGFP-AR的荧光显著增强，出现了FRET现象。通过计算，得出AR与iNOS相互作用的能量转移率为38.37±4.76％(n=10)，石斛酚作用之后其能量转移率为43.12±2.69％(n=10)，与对照组4.23±1.04％(n=4)相比较，差异均具有统计学意义(p＜0.01)。AR与iNOS相互作用的距离为6.50±0.22nm，石斛酚作用后AR与iNOS相互作用的距离为6.28±0.12nm，与对照组10.14±0.44nm相比较，差异具有显著的统计学差异(p＜0.01)。石斛酚处理后与非处理组比较能量转移率增加，相互作用的距离变小(p＜0.05)。 结论: 研究结果均表明AR与iNOS具有相互作用，AR与iNOS在整个HLEC细胞中均具有结合，其相互作用的距离小于10nm，经过石斛酚作用后其相互作用程度加强。
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