摘要
孔雀石绿残留在水产品中和环境中存在时间长，具有毒性高，残留高及潜在的致畸、致癌、致突变等危险性，美国、欧盟对水产品中孔雀石绿的使用都有明确的规定，我国已将孔雀石绿列在禁用兽药名单中，禁止用于全部食品动物中。 目前，孔雀石绿的含量一般都是使用仪器进行测定，但这些方法测定流程复杂、耗时长、成本高。试纸条测定具有易操作，费时短，成本低等优点，适于现场检测和筛查。本试验以孔雀石绿为研究对象，利用胶体金免疫层析技术，研制出用于检测孔雀石绿的免疫层析试纸条，并将其用于水产品检测。 采用磁力搅拌器加热方法，用柠檬酸三钠还原氯金酸，制备出了不同粒径的胶体金溶液，粒径在26 nm左右的胶体金标记孔雀石绿抗体的显色效果较好，最适pH为0.2 mol/LK2CO3添加量为4μL/mL，抗体加入量为15μg/mL，稳定剂加入量为30μL/mL的10％ BSA。选用样品垫GL-b01、金标垫GL0194、吸水垫H5076和Millipore公司135硝酸纤维素膜为试纸条材料，金标抗体稀释4×包被于金标垫上，检测线和质控线上分别用2.5 mg/mL的孔雀石绿-BSA结合物和0.1 mg/mL的羊抗鼠IgG平行定量喷涂于硝酸纤维素膜上。 试纸条对孔雀石绿标准品用目测比色法的检出限为10 ng/mL。试纸条对无色孔雀石绿、氯霉素、甲基蓝、四环素等物质无交叉反应，与结晶紫交叉反应率为66.7％，特异性和稳定性较好。应用试纸条检测水产品阴性样品，假阳性率为0％;阴性样本不同加标量的测定结果与液相色谱-串联质谱仪测定结果符合性较好，回收率为60％～80％，在实际样品测定时，孔雀石绿浓度大于25 ng/g时，试纸条能准确测定;当阴性样本孔雀石绿添加浓度为50 ng/g时，试纸条测定结果假阴性率为0％。 该试纸条检测结果稳定、易于识别，可作为初步筛选孔雀石绿在水产品中残留的有效手段，也可以为其它农残兽残快速检测试纸条的研制提供参考。
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