摘要
目的: Chemerin是一种新的脂肪细胞因子，主要通过其受体ChemR23发挥作用。Chemerin与转分化刺激因子密切相关。在转分化刺激因子的作用下，内皮细胞可以转分化为成纤维细胞。内皮细胞-间充质细胞转分化（ endothelial?mesenchymal transition，EndMT）是糖尿病肾病（Diabetic Nephropathy，DN）肾脏纤维化发生的重要机制。本研究旨在观察在糖尿病大鼠肾脏疾病进展过程中Chemerin/ChemR23表达水平的变化，并分析其与糖尿病肾病中 EndMT是否具有相关性。 方法: 选取80只160-180g的雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠，随机分为对照组（n=40）和 DM模型组（n=40）。模型组12h禁食不禁饮后采用链脲佐菌素（streptozotocin，STZ）75mg/kg腹腔注射来诱导DM大鼠模型，对照组注射等量的柠檬酸盐缓冲液。注射STZ72h后连续三天测随机血糖≥16.7mmol/L为糖尿病造模成功。每周测大鼠随机血糖、体重、尿白蛋白/肌酐(urinary albumin creatinine ratio,UACR)。分别于注射STZ后1、2、3、4、12周处死大鼠，每个时间点处死模型组和对照组大鼠各8只，称重右肾，计算肾体重比(Kidney to Body Weight Ratio,KBWR)；PAS染色观察肾组织形态改变；免疫组化检测肾组织中Chemerin和ChemR23的表达；免疫荧光双标检测肾组织中CD31和α-SMA双阳性细胞个数；Western Blot检测肾组织中Chemerin、ChemR23、CD31、α-SMA蛋白的表达；qRT-PCR检测大鼠肾组织中Chemerin、ChemR23、转化生长因子β1(TGF-β1)基因的表达；Spearman相关分析观察Chemerin与ChemR23、TGF-β1、CD31、α-SMA、CD31和α-SMA双阳性细胞个数的相关性。 结果: 与同周龄对照组相比模型组大鼠血糖明显升高，出现多饮、多食、多尿、体重减轻；与同周龄对照组相比，模型组4周时UACR、KBWR开始明显升高，模型组12周时血肌酐与同周龄对照组相比显著升高。PAS染色可见模型组4周时肾小球轻度肥大，模型组12周时基底膜轻度增厚，肾小球系膜细胞轻度增生，系膜基质增多；免疫组化可见模型组4周和12周时大鼠肾脏中 Chemerin和ChemR23的表达水平高于同周龄正常对照组。Western Blot可见随着糖尿病的病程进展，Chemerin、ChemR23、α-SMA蛋白表达逐渐增加、CD31的蛋白表达逐渐下降。qRT-PCR可见随着糖尿病的病程进展，Chemerin、ChemR23、TGF-β1的基因表达量逐渐增多。免疫荧光双标可见模型组4周和12周时CD31和α-SMA共表达细胞增多，且12周组多于4周组。Spearman相关分析显示糖尿病大鼠肾脏中Chemerin的mRNA表达水平与ChemR23的mRNA表达水平、TGF-β1的mRNA、α-SMA蛋白表达水平、CD31和α-SMA双阳性细胞数呈正相关，与CD31的蛋白表达水平呈负相关。 结论: 糖尿病大鼠模型中，随着糖尿病肾病病程的进展，肾组织中的 Chemerin、ChemR23表达逐渐增多，内皮细胞转分化而来的成纤维细胞数增多。Chemerin/ChemR23与糖尿病肾病中EndMT具有相关性。
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