摘要
目的：（1）探究安徽省临床分离的利福平耐药的金黄色葡萄球菌rpoB基因的突变特点，分析金黄色葡萄球菌对利福平耐药水平与 rpoB基因突变的相关性以及耐药菌株的基因同源性。（2）研究环丙沙星诱导在金黄色葡萄球菌对利福平耐药中的作用，以及对 rpoB基因突变频率和突变位点的影响。 方法：（1）随机选择2009.1-2010.5间来自安徽省耐药监测中心的88株利福平耐药及12株利福平敏感的非重复金黄色葡萄球菌，用Vitek-2微生物分析仪检测其对16种抗生素的耐药性并分析其耐药模式；对 rpoB基因的利福平耐药决定区进行PCR扩增测序并和金黄色葡萄球菌标准菌株ATCC29213进行比对；采用随机引物扩增多态性（RAPD）技术和金黄色葡萄球菌A蛋白分型（Spa）技术对其进行分子分型和同源性分析。（2）使用1/8、1/4和1/2MIC亚抑菌浓度的环丙沙星对8株利福平敏感的金黄色葡萄球菌进行诱导，比较诱导前后利福平耐药突变频率，检测耐药突变株利福平MIC值的变化和rpoB基因突变类型。 结果：所有88株耐利福平的金黄色葡萄球菌均为 MRSA，对β-内酰胺类、庆大霉素、红霉素、四环素、环丙沙星和左氧氟沙星均为100%耐药，对莫西沙星、克林霉素、复方新诺明、呋喃妥因的耐药率分别为98.8%、88.6%、9.1%、和3.4%，对万古霉素、利奈唑胺、奎奴普丁/达福普丁和替加环素均为100%敏感。在88株利福平耐药的金黄色葡萄球菌中，有83株为利福平高水平耐药（94.3%），另外5株为利福平低水平耐药（5.7%）。所有耐药菌株rpoB基因均有单个碱基改变引起的错义突变，突变点均位于利福平耐药决定区的clusterⅠ上，共有四种氨基酸替换类型，发生率分别为466Leu/Ser（87.5%）、477Ala/Asp（6.8%）、481 His/Asn（95.5%）和486Ser/Leu（4.5%），12株利福平敏感的金黄色葡萄球菌rpoB基因无错义突变检出。5株低水平耐利福平金黄色葡萄球菌仅有单个氨基酸替换，其中4株为486Ser/Leu（4/5），1株为481His/Asn（1/5）。83株高水平耐药菌株均有两个或者以上的氨基酸替换，最常见的模式是481His/Asn＋466Leu/Ser(92.8%，77/83)，其次为481His/Asn＋477Ala/Asp(6.0%，5/83)和481His/Asn＋466Leu/Ser＋477Ala/Asp（1.2%，1/83）。随机选择43株利福平耐药的金黄色葡萄球菌进行基因分型，RAPD分为4个型别，D型为优势型别，占全部菌株的58.5%。Spa分为7个型别，t030有37株（86.0%），为优势菌株。（2）1/8、1/4和1/2MIC的亚抑菌浓度环丙沙星诱导的耐药突变率与自发耐药突变率相比平均增加了1.3倍、66.5倍86.4倍。环丙沙星导致的利福平耐药突变株与临床分离的利福平耐药株rpoB基因突变类型不完全相同，出现了481His/Asn、481His/Tyr和479 Leu/Val三种氨基酸替换，还出现了478位缺失、470-473位四个密码子缺失和474Ala插入几种较少见的突变类型。 结论：（1）在本省医院内有高水平利福平耐药的金黄色葡萄球菌Spa t030克隆流行，与rpoB区481合并466位点突变紧密相关（2）环丙沙星亚抑菌浓度可显著增加金黄色葡萄球菌发生利福平耐药突变的频率并导致不同程度利福平耐药株的产生。
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