摘要
目的:心力衰竭的发病率近十年明显增高，冠状动脉左前降支被结扎后的缺血刺激，氧化应激等均会导致大量凋亡因子的释放，从而导致心肌细胞的坏死及启动心肌细胞的凋亡。近几年的研究表明，心肌细胞的凋亡和氧化在心衰的发生发展中发挥着重大作用，而心肌细胞形态和功能的最终丧失是心脏走向代偿失调的根本原因。硫化氢是人们发现的第三个重要内源性气体信号传导分子，在心血管系统中具有促进血管新生、抑制心肌重构、保护心肌等功能。但由于它不稳定易挥发难以准确给药等弊端，导致其在临床上很难发展。而内源性硫化氢的供体炔丙基半胱氨酸(SPRC)可调节内源性硫化氢的生成，抑制心肌细胞凋亡和左心室重构，对心肌梗死的发生有预防和治疗作用。它属于生物药剂学分类系统(BCS)I类药物，具有高溶解度和高渗透性，转运机制为膜孔转运，口服吸收较好，适合开发为口服给药制剂。但SPRC半衰期较短并具有刺激性气味，为延长其在体内作用时间，产生更稳定更持久的H2S，并降低刺激性，我们改进了剂型，使用尤特奇RS30D作为载体制备SPRC缓控释剂(CR-SPRC)，并探讨CR-SPRC对大鼠心肌梗死后心力衰竭的保护作用及相关分子机制，同时也初步探究血管新生在CR-SPRC心脏保护作用中可能扮演的角色。 方法:体外采用模拟人工胃测缓释曲线，体内使用药代动力学方法测24小时的血药浓度。主实验是制备心衰模型进行药效和机制的探究:采用结扎大鼠冠状动脉左前降支制备急性心肌梗死模型，结扎术后心梗的大鼠通常于术后2周时发生心力衰竭（HF）。我们将术后48h存活大鼠随机分为以下7组并给药6周:(1)Sham组;(2)HF组;(3)HF+SPRC组;(4)HF+CR-SPRC组;(5)HF+CR-SPRC+炔丙基甘氨酸(PAG)组;(6) HF+PAG组;(7) HF+Digoxin阳性药组。治疗期间观察大鼠的体重变化及存活率，6周后进行超声心动图检查，测定LVID、LVPW、LVAW、EF、FS等指标。并经右颈总动脉插管，采用硫酸钡造影法观测心脏的血管数量。采用TTC染色法和Masson染色法检测心脏梗死面积及心肌纤维化面积。取血浆测H2S浓度，取左室梗死周边区和血浆测SOD、CK、CAT及GSH的水平。通过Western blot观察CR-SPRC对凋亡存活相关因子(bcl-2、bax、caspase-3、caspase-9)，ST2信号通路以及胱硫醚-Υ-裂解酶(CSE)蛋白表达的影响。 结果:CR-SPRC在体内体外都能够缓慢释放，体外8小时释放完全，体内6小时达到峰值。CR-SPRC能明显提高大鼠的存活率，降低心衰大鼠的心脏梗死面积及左室纤维化面积。同时CR-SPRC能提高左室射血分数，降低左室内径指数，提高心衰大鼠的心功能。CR-SPRC亦能促进心脏中的血管新生，尤其能促进结扎部位周围的血管的形成。CR-SPRC这一系列的心脏保护作用皆优于普通SPRC。CR-SPRC可以增加血清中H2S浓度，以及梗死周边区中CSE蛋白表达，且作用强度高于普通SPRC。在抗氧化及抗凋亡的保护机制方面，CR-SPRC可抑制细胞的CK漏出，并维持GSH，CAT和SOD等抗氧化酶的水平;CR-SPRC对心脏梗死周边区中凋亡相关因子bax、caspase-9和caspase-3有显著的抑制作用。另外，CR-SPRC还能够降低梗死心脏中危险因子ST2的表达，并调控下游的MAPK及Akt信号通路。 结论:实验结果显示CR-SPRC对心力衰竭大鼠有显著的心脏保护作用，并且保护作用优于普通SPRC，为硫化氢介导的药物治疗提供了一个崭新的研究方向。
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